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单宁含量检测试剂盒微量法 [复制链接]

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单宁含量检测试剂盒(微量法)

产品货号:BA

产品规格:管/96样

产品说明:

单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物;与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性,单宁在nm下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

溶液的配制:

1.标准品:10mg单宁酸。临用前加入1.mL提取液溶解为nmol/mL的标准液。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过30-50目筛之后,称取约0.05g,加入1mL提取液,封口膜封口防止液体溅出,于70℃水浴提取30min,期间可摇晃数次。rpm,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待测。

二、测定步骤

1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至nm。提取液调零。

2.标准溶液的制备:将nmol/mL标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.、1.、0.nmol/mL标准溶液。

3.加样表

充分混匀震荡5min,g离心20min(若上清中仍有颗粒或浑浊,请多次离心至完全清澈)。取μL上清液测定nm下的吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管,计算ΔA测定=A对照管-A测定管,A标准=A标准管-A空白管。

三、单宁含量计算:

1.标准曲线的绘制:

以标准溶液的浓度为x轴,以A标准为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程中得到x(nmol/mL)。

2.单宁含量计算:

(1)按蛋白浓度计算

单宁含量(nmol/mgprot)=x×V提取÷(V提取×Cpr)=x÷Cpr

(2)按样本质量计算

单宁含量(nmol/g质量)=x×V提取÷W=x÷W

Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL(蛋白浓度需重新用PBS提取测定);W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL。

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

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