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DNA的泳动受电泳缓冲液的组成和离子强度 [复制链接]

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所以,当电压增大时,琼脂糖凝胶分离的有效范围反而减小。要获得大于2kbDNA片段的良好分辨率,则所用电压不应高于5~8V/cm。●琼脂糖种类。常见的琼脂糖主要有两种:标准琼脂糖和低熔点琼脂糖(Kirkpatrick)。正在研制的第三种是熔点和凝点介于上述二者之间的琼脂糖,它兼有两者的特性。每一大类中都有不同种类的琼脂糖用于不同的分离目的,请见表2-1和表2-2以及相应的信息栏“琼脂糖的级别及其性质”。●电泳缓冲液。DNA的泳动受电泳缓冲液的组成和离子强度的影响。缺乏离子(如用水替代电泳槽及凝胶中的缓冲液)则电导率降至很低,DNA迁移极慢,或者完全不动。高离子强度时,如错用了10X电泳缓冲液,电导率升高,即使应用适中的电压也会产生大量的热量。最严重时凝胶会熔化,DNA会变性。制造标准(高熔点)琼脂糖的原料是两种海藻Gelidium和Gracilaria.这两种琼脂糖的凝,点和熔点有所不同,但是在实际应用中每种来源的琼脂糖都可以用于分析或分离1kb~25kb范围的DNA片段。几种市售级别的琼脂糖测试表明:①溴化乙锭染色后的背景荧光很低;②没有DNA酶和RNA酶;③很低的限制酶和连接酶抑制作用:④产生适量的电内渗(EEO,请见后文)。新型标准琼脂糖具有高凝胶强度和低电内渗(EEO),可以灌制浓度低至0.3%的凝胶。这种凝胶用于常规电泳能方便地分离高分子质量DNA(高达60kb)。
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