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ELISA试剂盒操作步骤有哪些 [复制链接]

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  ELISA试剂盒是一种常用于生物分子检测的实验工具,中文简称酶联免疫吸附实验。ELISA试剂盒通常包括特定抗体、酶标记的二抗、底物等多种生化试剂,可用于检测血清、尿液、唾液、细胞、组织等生物样品中的蛋白质、肽、荷尔蒙、抗体、细胞因子、病*等生物分子。该技术广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。


  


  产品特点


  


  1、高效、灵敏、特异的抗体;


  


  2、稳定的重复性和可靠性;


  


  3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;


  


  4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;


  


  5、节省实验经费。


  


  ELISA操作步骤


  


  1、包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。


  


  2、洗涤:弃包被液(用力拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。


  


  3、封闭:每孔加封闭液(1%BSA)μl,37℃封闭2h。


  


  4、洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。


  


  5、结合一抗:用1×PBST缓冲液1∶稀释被检血清,每孔μl,要设立阴性对照,37℃孵育1.5h。


  


  6、洗涤:同上。


  


  7、结合酶标二抗:每孔加1×PBST缓冲液倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀释倍数根据产品不同有所不同,可按说明书进行)50μl,37℃孵育1h。


  


  8、洗涤:同上。


  


  9、显色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室温避光显色10min。


  


  10、待显色后,每孔加入50μl终止液(2mol/LH2SO4)终止反应。使用酶标仪读取nm的OD值,以确定血清抗体水平。

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