肉桂醇脱氢酶CAD检测试剂盒肉桂酸 [复制链接]

肉桂醇脱氢酶（CAD）检测试剂盒（肉桂酸微板法）

产品货号：BA

产品规格：60T

产品简介/p>

肉桂醇脱氢酶(cinnamylalcoholdehydrogenase,CAD)是催化香豆醛形成松柏醇的酶。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸、NADP作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算，该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂醇脱氢酶活性，尤其适用于检测水果中肉桂醇脱氢酶活性，60T可以检测约57~58个样品。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.蒸馏水

2.研钵或匀浆器

3.离心管或试管

4.低温离心机

5.水浴锅或恒温箱

6.96孔板酶标仪

操作步骤：

1.准备样品：

①植物样品：取1g植物组织或水果中层果肉置于液氮中迅速研磨或匀浆，加入1ml预冷的CADLysisbuffer，4℃g离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用CADLysisbuffer进行适当匀浆，g，4℃g离心15~20min，取上清液，-20℃冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的肉桂醇脱氢酶，可以使用CADLysisbuffer稀释进行恰当的稀释。

2.配制CADAssaybuffer工作液：取1支NADP完全溶解于10mlCADAssaybuffer，即为CADAssaybuffer工作液。CADAssaybuffer工作液4℃保存1周，-20℃保存3个月。

3.CAD加样：取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的CAD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。

4.CAD检测：以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定nm处测定孔的吸光度(记为A测定0)。37℃准确孵育10min，立即加入10μlCAD终止液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。注意：加入CAD终止液终止反应不是必须步骤，可37℃准确孵育10min后直接以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。尚宝建议立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1~5min内，其后反应趋于平缓。

注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADP的消耗速率，再进一步推算出CAD的量，因此立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。

计算：

CAD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。

组织样品CAD(U)={(A测定1-A测定0)×VT}/(W×VS×0.01×t)

式中：A测定1=孵育10min后测定管的吸光度

A测定0=加入CADAssaybuffer工作液后立即测定的测定管吸光度

W=组织样本的重量(g)

VT=提取酶液的总体积(ml)

VS=测定时所用酶液体积(ml)

t=反应时间(min)=10

液体样品CAD(U)=(A测定1-A测定0)/(0.01×t)

式中：A测定1=准确孵育10min测定管的吸光度

A测定0=加入CADAssaybuffer工作液后立即测定的测定管吸光度

t=反应时间(min)=10

注意事项/p>

1.待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2.提CAD酶液取时，注意低温操作，防止酶活性，亦可-20℃保存。

3.CAD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。

4.如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

6个月有效。