中医白癜风医院在哪 http://pf.39.net/bdfyy/bjzkbdfyy/本实验通过苦寒泻下法制作脾虚小鼠模型，让学生熟悉中医脾虚证动物模型的造模方法，并从生理学、病理学、生物化学等方面揭示脾虚的本质，以补脾益气典型方剂进行反证，培养学生多学科的实验技术和进行中医科研的思维和方法。
大黄泻下致脾虚动物模型的消化系统功能具有不同程度的损害，因此，选用与消化功能相关的指标，如血清D-木糖排泄率、淀粉酶活性、琥珀酸脱氢酶以及酚红在消化道的排泄等指标反映消化系统功能，并以四君子汤这一健脾益气的典型方剂干预，验证补脾方剂的效果。
昆明种小鼠，清洁级，体重18g±2g。
器材：灌胃针，弯钳，弯镊，眼科剪，弯剪，小鼠固定板。试剂：%大黄制剂，D-木糖醇，酚红糊剂，淀粉酶试剂盒，琥珀酸脱氢酶试剂盒，四君子汤。
四君子汤方解参见第二章实验五“气能生血理论的实验观察”。
1.试剂的配制（1）%大黄制剂的制备：大黄用水浸泡1小时后，煮沸40分钟，用纱布过滤，再加入冷水煮沸20分钟，过滤后合并两次滤液，于60℃水浴浓缩成%（1g生药/mL）煎液，4℃保存。（2）酚红糊剂：按每15mL0.02%酚红溶液加1g淀粉的比例加热调成糊剂即可。
2.分组 小鼠随机称重、标号，分为正常对照组、脾虚模型组和四君子汤治疗组，每组10只。
3.小鼠脾虚模型的制备 小鼠每日喂食大黄水浸煎剂1mL（相当于生药1g），连续喂养8天，并每天观察它的表现，脾虚动物会出现体重减轻、倦怠、便溏、毛发枯槁、畏寒等症状。第9天灌服四君子汤反证治疗8天，观察小鼠体重的变化和其他症状的改善。
4.取材 取血测定血清中淀粉酶和琥珀酸脱氢酶的活性；取尿液测定D-木糖含量；取消化系统各段测定酚红的含量。
5.指标的测定
（1）D-木糖排泄率测定：参照文献方法，测定小鼠尿中D-木糖含量。
（2）血清淀粉酶和琥珀酸脱氢酶活性测定：采用比色法测定。
（3）胃排空、肠推进速度测定：各组动物按照25mL/kg体重灌服酚红糊剂，30分钟后脱臼处死动物，结扎贲门、幽门及回盲部，从幽门至回盲部6等分剪断小肠，依次为第1段、第2段至第6段，分别将胃和各段小肠取出剪碎，用蒸馏水冲洗3次，至洗液体积为3mL。而后在各管中分别加入0.3mo1/LBa（OH）21mL，充分混匀后静置3～5分钟，再各加1mL15%ZnSO4，混匀后r/min离心10分钟，各取上清液3mL加10%NaOH0.5mL，混匀后测光密度，对照标准曲线算出胃和小肠各段酚红残留率。胃排空百分率、小肠推进相对百分率（指小肠各段酚红的残留量占整个小肠酚红总量的百分比）按下列公式计算：胃排空百分率（%）=〔灌入胃中酚红总量（mg）-胃中残留量（mg）〕/〔胃中酚红总量（mg）〕×%小肠推进相对百分率（%）=〔小肠某段酚红残留量（mg）/小肠各段酚红残留量之和（mg）〕×%实验数据记录见表7-1。
6.统计学处理 使用SPSS10.0统计软件，采用单因素方差分析比较各组之间的差异。
1.脾虚症状的出现是一个渐进的过程，因此，注意观察动物的表现。
2.摘眼球取血时注意不要溶血。
1.一般体征变化 在造模后各组小鼠逐渐出现委靡倦怠、眯眼、少动、便溏、泄泻、耳色淡白、耳朵后背被毛散乱无光泽等脾虚证的表现，劳倦过度组小鼠较其他造模组小鼠更加懒动，受刺激反应更加迟钝，行走呈匍匐状。
2.消化系统功能（1）血清D-木糖含量：是与小肠吸收功能成正相关的一个较为敏感和特异的检测指标。本次实验结果表明，模型组小鼠血清中D-木糖含量与对照组相比显著降低，表明脾虚小鼠D-木糖醇吸收率减低，四君子汤治疗后，D-木糖醇吸收率减低现象得到明显改善。（2）淀粉酶活性：也是一个反映消化吸收功能较为敏感和特异的检测指标。脾虚模型动物血清淀粉酶活性显著降低，四君子汤对淀粉酶的活性具有一定的改善作用。（3）琥珀酸脱氢酶：是细胞线粒体内膜氧化磷酸化的标志酶之一，琥珀酸脱氢酶活性下降时，细胞物质转运、能量代谢功能低下，影响离子运送，从而使细胞内池腔混浊肿胀，影响消化酶合成与分泌，以及细胞正常生理功能活动，以致消化吸收障碍。本实验结果表明，模型组小鼠血清中琥珀酸脱氢酶活性与对照组相比均显著降低，而四君子汤能够改善琥珀酸脱氢酶的活性。（4）胃排空、肠道推进速度：是胃肠平滑肌在神经、体液因素调节下电活动、机械活动协调的结果，采用测定小肠各段酚红含量的变化，能更客观、准确地反映食物在小肠的推进状况。模型组小鼠小肠各段酚红的含量均降低。
1.脾虚证形成的病因病机是什么？
2.大黄导致脾虚的机制是什么？与临床人的脾虚证的成因有什么不同？该模型有何可改进之处？
3.四君子汤改善脾虚症状的机制是什么？
4.中医脾虚证的病变本质是什么？
