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phi29DNA聚合酶是一种具有高持续合成能力的聚合酶(高于70kb)

具有强大的链置换活性,可实现高效等温DNA扩增。

1.单细胞基因组扩增

德国QIAGEN公司推出的“REPLI-gSingleCellKit含有REPLI-gscPolymerase”,这是一种优化的新型高保真Phi29聚合酶。该试剂盒采用多重置换扩增技术扩增复杂的基因组DNA,温和的碱孵育能够避免DNA片段化,促进对所有位点的无偏差扩增。该试剂盒十分适用于分离的肿瘤细胞或细菌细胞等单一细胞,能够扩增获得高产量DNA。此外,该试剂盒还配有专用于鲜血或干血、新鲜或冷冻组织的实验方案,可用于多种研究样本。常规DNA产量可达40g,对模板的起始量要求低,因此进行后续遗传分析时无需检测DNA浓度。REPLI-gSingleCellKit的扩增产物平均长度超过10kb,且覆盖所有位点,适合于多种应用,包括二代测序、基于芯片技术的比较基因组杂交、焦磷酸测序和real-timePCR分析

2.单细胞转录组扩增:

REPLI-gWTASingleCellKit包含新颖的REPLI-gSensiPhiDNA聚合酶,以及从1–个细胞或等量的小量样本进行全转录本扩增(WTA)的优化缓冲液和试剂。高效裂解细胞、彻底清除基因组DNA(gDNA)和敏感的逆转录物之后,采用多重置换扩增(MDA)技术,以可以忽略的序列偏差对整个转录本均一地扩增cDNA(参见MultipleDisplacementAmplification(MDA)technology)。使用REPLI-gWTASingleCellKit扩增的cDNA,经证明在二代测序技术(NGS)和real-timePCR应用中具有各细胞间和各次实验间的高度可重复性(参见Highlevelofexperimentalreproducibility)。扩增的cDNA可以轻松地应用于各种下游应用(参见REPLI-gamplifiedcDNAperformslikegDNAindownstreamexperiments)。

3.全基因组和全转录组扩增

REPLI-gCellWGAWTAKit可以直接从细胞中有效扩增gDNA和cDNA,并且可以与经常在临床研究分析中出现的各种样本一起使用,包括肿瘤细胞、干细胞、分选细胞或其它小量样本细胞裂解:在5分钟内将样本(含有25–个细胞)有效地裂解,同时保持RNA或DNA的完整性。裂解的细胞被分为相等体积的两等份。第一等份试样用于WGA,而第二等份试样用于总RNA的WTA,或富集mRNA(polyA+)RNA。全基因组扩增:细胞裂解之后,一等份试样中的DNA被修饰用于高效的连接反应。由于该连接反应的性质,DNA片段并未按照它们原本存在于生物体中的顺序组装。然而,这并不影响下游应用中的核酸序列检测(例如,基因多态性),例如NGS、芯片分析或者qPCR。连接反应后,使用MDA技术和新颖的、高亲和力REPLI-gSensiPhiDNAPolymerase进行扩增。全转录本扩增:细胞裂解后,在开始WTA处理之前,gDNA被从第二等份试样中去除,这是由于转录水平的精确测量依赖于能否消除gDNA污染所造成的假阳性结果。然后利用高效率的连接反应与扩增反应制备cDNA。根据随后的逆转录反应过程中所选择的底物,所有总RNA富集的转录物或只有polyA+mRNA富集的多聚腺苷酸转录物将会被扩增。

4.全基因组和全转录组建库试剂盒

QIAseqFXSingleCellDNALib.Kit(96)

该试剂盒可从单个细胞(包括具有高GC含量的区域)提供出色的基因组覆盖范围。与基于PCR的全基因组扩增方法相比,QIAseqFX单细胞DNA库试剂盒中包含的多置换退火技术消除了PCR重复,并最大程度地减少了GC偏差,从而确保了高的文库多样性并最大程度地覆盖了基因组范围,即使是单细胞也是如此。

QIAseqFXSingleCellRNALib.Kit(24)

QIAseqFX单细胞RNA库工具包依靠高效的MDA反应来扩增cDNA,并生成不需要库扩增的足够材料,从而提供了完全无需PCR的工作流程。这消除了PCR重复,并使检测到的转录本数量最大化,包括长转录本。

民族品牌:absin-您身边的科研百宝箱

SingleCellWholeGenomeAmplificationKit货号:abs

单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29DNA聚合酶等温扩增体系,Phi29DNA聚合酶是从Bacillussubtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29DNA聚合酶具有很强的链置换活性,可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性,保真度高于绝大多数高保真酶,因此Phi29DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量,如果以DNA样品为模板,需避免使用降解的DNA作为起始模板。产品特点:高覆盖度:经过扩增后可达到95%以上的覆盖度。高均一度:无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增。高保真:具有很强的校正功能,保真度高。高灵敏:可实现从单个细胞样本的全基因组扩增。

WholeGenomeAmplificationKit货号:abs

全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29DNA聚合酶等温扩增体系,Phi29DNA聚合酶是从Bacillussubtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29DNA聚合酶具有很强的链置换活性,可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29DNA聚合酶具有很强的3→5外切酶活性,保真度高于绝大多数高保真酶,因此Phi29DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。本试剂盒可以实现少量DNA样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。本试剂盒要求DNA样品不能严重降解,以减少因模板量太少造成不平衡扩增。扩增产物可以稀释后用于后续的DNA分析。产品特点:高覆盖度:经过扩增后可达到95%以上覆盖度。高均一度:无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增。高保真:具有很强的校正功能,保真度高。灵敏:可实现极少量样本的全基因组扩增。

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