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任意单位,基于DNA连接酶连接黏性末端的 [复制链接]

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●一个Weiss单位(Weissetal.b)定义为在37C下,20min内催化将Inmol3p从无机焦磷酸盐交换到ATP所需的连接酶的量。

●Modrich-Lehman单位(ModrichandLehman)是基于放射性标记的具有3-羟基和5-磷酰基末端的d(A-T)n共聚物转换为耐受外切核酸酶II消化的形式,现在已很少使用。一个Modrich-Lehman单位定义为在标准测定条件下在30min内将nmold(A-T)%转换为外切核酸酶II耐受形式所需的酶量。

●任意单位,基于DNA连接酶连接黏性末端的能力,由商业供应商定义。这些单位往往比定量更主观,对重视精度的研究者几乎提供不了什么指导。

在缺乏有效信息的情况下,大多数研究者必须通过估测建立连接反应,这意味着不可避免地要使用比实际需要量更多的连接酶,而这正是商业公司所寻求的。

作为一个粗略的指南,1WeissU约相当于60个黏性末端单位(NewEnglandBiolabs公司所定义的)。

因此,在16C,30min内,0.WeissUT4DNA连接酶应连接50%的用HindII消化的5ugλ噬菌体DNA所得到的片段。T4RNA连接酶由Silber等()首次报道,催化单链RNA或DNA连接到寡核糖核苷酸或寡脱氧核苷酸(Englandetal.;UhlenbeckandGumport)。

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