北京哪家白癜风医院好 http://www.xftobacco.com/m/谷丙转氨酶（GPT）活性检测试剂盒（微量法）
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA
产品规格：管/48样
产品简介：
GPT（EC2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在nm读取吸光值
并计算酶活力。
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体3.5mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1支，20mol/mL丙酮酸钠标准品，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸水。
操作步骤：
一、样品测定的准备
1、细胞或细菌的制备：
先收集细胞或细菌样品到离心管内，弃上清，按照每万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。3g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进冰浴行匀浆。3g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2、标准曲线的测定
首先将标准品稀释至2mol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：
3．在EP管或在96孔板中加入下列试剂
注:0mol/mL标准管为空白管。
三、计算公式：
1、标准曲线的绘制：
以各标准溶液浓度为x轴，以A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A对照管）带入方程求x值。
2、GPT活性计算：
（1）按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每g样品催化产生1mol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT（U/g鲜重）=x×（V样本+V试剂一）÷（W×V样本÷V样总）÷T=12x÷W。
（2）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1mol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT（U/mgprot）=x×（V样本+V试剂一）÷（Cpr×V样本）÷T=12x÷Cpr。
（3）按血清（浆）体积计算：
单位定义：每小时每mL血清（浆）样品催化产生1mol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT（U/mL）=x×（V样本+V试剂一）÷V样本÷T=12x。
（4）按细胞或细菌数量计算：
单位定义：每小时每个细胞或细菌催化产生1mol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT（U/cell）=x×（V样本+V试剂一）÷（×V样本÷V样总）÷T=0.x。
V样本：样本体积，0.mL；V试剂一：试剂一体积，0.mL；V样总：提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；：细胞或细菌总数，万。
