碱性蛋白酶（AKP）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/48样
产品简介：
AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在nm有特征吸收峰，测定nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
产品内容：
提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入4mL提取液，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂三：液体20ml×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体4mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，20μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5mLEP管和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，00rpm4℃离心10min，取上清液，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、试剂二和试剂三置于40℃水浴保温30min以上。
3、标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用，现用现配。
4、样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）
取μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。
三、碱性蛋白酶活性计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活单位定义：40℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
AKP活性（U/mgprot）=C标准品×ΔA测定÷ΔA标准×V1÷（Cpr×V2）÷T=0.×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
酶活单位定义：40℃每克样本每分钟催化水解产生1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
AKP活性（U/g质量）=C标准品×ΔA测定÷ΔA标准×V1÷（W×V2÷V3）÷T=0.×ΔA测定÷ΔA标准÷W
C标准品：0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL）；W：样品质量（g）；V1：酶促反应总体积（mL），0.1mL；V2：加入反应体系中粗酶液体积（mL），2×10-2mL；V3：粗酶液总体积（mL），1mL；T：催化反应时间（min），10min。
注意事项：
若反应较弱，（A测定管－A对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。
