白癜风专家李从悠 http://m.39.net/disease/a_5422078.html肌酐含量检测试剂盒（肌氨酸氧化酶法）（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介：
肌酐（creatinine，Cr），化学式是C4H7N3O，是肌肉在人体内代谢的产物，主要由肾小球滤过排出体外。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。
样品中的肌酐在肌酐酶的催化下水解生成肌酸。在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素。肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化产生过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前每支加入1.1mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂-20℃分装保存两周。
2.试剂二：临用前每支加入1.05mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂-20℃分装保存两周。
3.试剂三：临用前每支加入1mL蒸馏水（T/96S），充分溶解。为方便储存故多给一支。用不完的试剂-20℃分装保存两周。
4.试剂三工作液：根据试验所需用量，按照试剂三:蒸馏水=1:9的比例，充分混匀，现配现用。
5.试剂四：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂-20℃分装保存两个月。
6.试剂五：临用前每瓶加入2.2mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂-20℃分装保存两周。
7.试剂六：临用前根据实验所需用量，按照试剂六A液：试剂六B液=1:1的比例，充分混匀，现用现配。
8.标准品：1mg肌酐。临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解，即1mg/mL标准储备液，2-8℃保存1个月。临用前将其稀释至μg/mL作为标准液待测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、超声破碎仪。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）
1.细菌、细胞样本的制备：按照细胞数量（个）：提取液一体积（mL）为~0：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率W，超声3秒，间隔9秒，总时间5min）；于4℃，10g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，混匀，4℃，10g离心10min后取上清待测。
2.组织样本的制备：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，10g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，混匀，4℃，10g离心10min后取上清待测。
3.血清（浆）：取μL血清（浆）加入1mL提取液一，4℃，10g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，混匀，4℃，10g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.按下表步骤加样：
注：空白管只需做1-2次。
三、肌酐含量计算
1.计算公式
（1）按照蛋白浓度计算
肌酐含量（μg/mgprot）=C标×ΔA测÷ΔA标×V样÷（V样×Cpr）=×ΔA测÷ΔA标÷Cpr
（2）按照样本质量计算
肌酐含量（μg/g质量）=C标×ΔA测÷ΔA标×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）
=.5×ΔA测÷ΔA标÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
肌酐含量（μg/cell）=C标×ΔA测÷ΔA标×（V上清+V提取液二）÷（细胞数量×V上清÷V提取液一）
=.5×ΔA测÷ΔA标÷细胞数量
（4）按照血清（浆）体积计算
肌酐含量（μg/mL）=C标×ΔA测÷ΔA标×(V上清+V提取液二)÷[V液体×V上清÷(V提取液一+V液体)]
=.5×ΔA测÷ΔA标
C标：标准管浓度，μg/mL；V样：加入样本体积，20μL=0.02mL；V上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液一：加入提取液一体积，1mL；V提取液二：加入提取液二体积，0.15mL；W：样本质量，g；Cpr：样
本蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以计；V液体：液体样本体积，0.1mL。
注意事项：
1.提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。若想要用蛋白浓度计算肌酐含量需要另取样本，即取相同质量的组织、同等数目的细菌或细胞，用1.mLPBS（生理盐水）匀浆；取相同体积的血清（浆），用1.mLPBS（生理盐水）匀浆（相当于提取步骤最终样本上清液），用BCA法进行蛋白浓度测定。
2.如果测定吸光值超过标准管吸光值，建议用蒸馏水稀释样本后再进行测定。如果ΔA测定小于0.01，建议增大样本量后再进行测定。
实验实例：
1.取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液一进行匀浆研磨离心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，离心取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测=A测定-A空白=0.-0.=0.，ΔA标=A标准-A空白=0.-0.=0.。按样本质量计算含量得：
肌酐含量（μg/g质量）=.5×ΔA测÷ΔA标÷W=.7μg/g质量。
2.取μL牛血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，离心取上清，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测=A测定-A空白=0.-0.=0.，ΔA标=A标准-A空白=0.-0.=0.。按照液体体积计算含量得：
肌酐含量（μg/mL）=.5×ΔA测÷ΔA标=.5μg/mL血清。
