北京最好的白癜风医院排名 https://baijiahao.baidu.com/s?id=1734423642479043583&wfr=spider&for=pc前言在进行生物信息学评估之后，通常会通过扩展表征研究对潜在候选分子进行实验评估。与mAb可开发性评估高度相关的质量属性汇总在表3中。通常，可用于测试的初始材料是通过瞬时转染（例如HEK细胞）产生的。可以评估与表达宿主无关的特性，例如一级序列，疏水性，溶解性，热稳定性和抗原结合亲和力。另一方面，大多数PTM高度依赖于细胞系和细胞培养条件，例如pH，温度和细胞培养持续时间。这些依赖于细胞系的属性应使用由稳定细胞系产生的材料进行评估，这些材料将用于临床或商业生产。一级结构确认和序列变异体预期氨基酸序列的构象是进一步分析和开发mAb先导候选分子的先决条件。现代质谱（MS）具有以≤2Da的精度准确测量IgG的分子量（约kDa）的能力。可以通过液质联用（LC-MS）和MS/MS肽图确认完整的一级序列。多项研究表明存在低丰度序列变异体，通过使用LCMS/MS与数据库搜索相结合，可以检测和鉴定低水平的序列变异体;存在极低丰度序列变异体的原因可能是自然发生的转录和翻译过程中的低频错误。通过广泛的表征，可以选择具有最小序列变异的mAb候选分子和克隆。翻译后修饰LC-MS具有很高的灵敏度，快速的周转时间，最重要的是能够获得深入序列及修饰信息，因此在可开发性评估中起着至关重要的作用。可从LC-MS完整分析，从亚基或肽水平获得PTM和mAb信息。完整水平的LC-MS分析能够检测各类修饰，例如糖型，N末端pyroGlu，C末端Lys，C末端酰胺化和糖基化。在亚基水平或还原成轻链和重链后的LC-MS分析将修饰定位于Fab，F（ab′）2，Fc区，轻链或重链。除了传统上使用的木瓜蛋白酶，使用有限的Lys-C或Ides酶消化可以实现更特异性的消化。IdeS消化和还原的结合将每个片段的分子量降低到23-25kDa，从而可以测量单同位素分子量。最终，在肽水平上的分析可以精确定位在完整和亚基水平上检测到的修饰位点。更重要的是，在肽水平上的分析可以检测到在完整和亚基水平上无法检测到的修饰，例如Asn脱酰胺，分子量差异约为1Da。由于色谱分离，没有分子量差异的修饰，例如Asp异构化，从L-Cys到D-Cys和Ser外消旋化，也可以通过LC-MS检测。表4列出了所有据报告对LC-MS检测到的mAb进行的修饰。重点应放在与潜在问题属性对应的修饰上。对于那些高度依赖细胞系的PTM，有必要在整个开发过程中使用稳定细胞系中的材料进行重新评估。比较不同候选分子的依据是修饰的性质及其相对百分比。基于安全性和功效考虑修饰修饰与安全性和功效问题有关，出现问题属性，包括脱酰胺，异构化，Met和Trp氧化，未配对的半胱氨酸和可变域中的其他糖基化。在扩展的表征和强制降解研究期间，应仔细检查这些修饰。寡糖有三种类型，α1,3-Gal，NGNA和高甘露糖，应仔细评估。如前所述，α1,3-Gal和NGNA具有免疫原性。由于缺乏核心岩藻糖，高甘露糖已被证明可导致较短的体内半衰期并增强抗体依赖性细胞介导的细胞*性（ADCC）。此外，由于岩藻糖基化水平与增强的ADCC相关，因此必须对其进行监测，这取决于mAb的作用机理（MOA）可能是有益的或有害的。较高的岩藻糖基化水平对于靶向细胞表面抗原的mAb有益并引发细胞杀伤，而对于仅阻断细胞表面抗原的mAb则有害。应当使用从即将用于临床和商业生产稳定细胞系，产生的材料重新评估那些寡糖的水平。与降解相关的修饰尚未报道这组修饰会影响产品的安全性或功效，但可能会引起免疫原性，因为这些修饰在人类内源性IgG或降解产物中均不存在。这组修饰包括部分前导序列，三硫键，硫醚和糖基化的存在。为了最大程度地降低这种风险，应选择这些修饰类型中含量最低的单克隆抗体候选物。此类别中的修饰也可能高度依赖于细胞系和细胞培养参数，例如温度，pH，培养基组成和配方。引起异质性的修饰N末端pyroGlu的形成和C末端Lys的部分去除是引起分子异质性的两个特征充分的修饰，但对安全性或功效没有影响。另外，这些修饰的水平高度依赖于细胞系和细胞培养条件。与Fc的糖基化相关的末端Gal的水平也由于其对过程变化的敏感性而值得注意。末端Gal对结构，稳定性或清除没有影响。最近的研究表明，末端半乳糖可能对ADCC的影响最小，但对CDC（(
