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半胱氨酸Cys含量检测试剂盒可见分 [复制链接]

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半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒(可见分光光度法)

产品货号:BA

产品规格:50管/48样

产品内容:

提取液:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体45mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前1天,向试剂二中加5mL蒸馏水充分溶解,再加磷酸1.25mL混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴2h;冷却后加20mL蒸馏水,4℃可保存2周。

标准品:粉剂×1支,10mg半胱氨酸,4℃保存。

产品说明:

蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解*、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在nm处有吸收峰;通过nm吸光度,计算Cys含量。

需自备的仪器和用品:

低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、磷酸和蒸馏水。

操作步骤:

一、半胱氨酸提取:

1、液体样品中半胱氨酸提取:取0.2mL液体样品,加提取液0.3mL,充分混匀,rpm4℃离心10min,取上清液,待测。

2、组织中半胱氨酸提取:称取约0.2g组织,加入提取液0.5mL,冰上充分研磨,rpm4℃离心10min,取上清液待测。

二、测定操作:

1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到nm,蒸馏水调零。

2.标准液的配制:将标准品加入0.mL蒸馏水,可得到mol/mL的标准液,稀释为40、20、10、8、2、1、0.5、0.25mol/mL浓度的标准溶液。

3.按下表加入各试剂

三、样品中半胱氨酸含量计算:

1、标准曲线的绘制:

以各标准溶液浓度为x轴,以A(A标准管-A空白管)为y轴做标准曲线,得到方程y=kx+b。将(A测定管-A对照管)带入方程求x值。

2、半胱氨酸含量计算:

(1)按液体样本的体积计算

半胱氨酸含量(mol/mL)=x×V样总÷V=2.5x

(2)按鲜重计算:

半胱氨酸含量(mol/g鲜重)=x×V样总÷W=0.5x÷W

V:液体样本体积,0.2mL;V样总:提取体系体积,0.5mL;W:样品质量,g。

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