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酸性磷酸酶ACP特性及测定方法提供 [复制链接]

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酸性磷酸酶acidphosphatase(ACP)又称酸性磷酸酯酶;正磷酸单酯磷酸水解酶,E.C.3.1.3.2。酸性磷酸酶(ACP)是一种非特异性磷酸单酯酶,可催化几乎所有的磷酸单酯水解反应,生成无机磷酸和相应的醇、酚和糖等,还可以催化磷酸基团的转移反应,直接参加磷代谢,并在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥重要作用。诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一,血清酸性磷酸酶活性已成为诊断和监测多种疾病重要手段。

一、概况

1.反应式

最适pH值为4.9~5.0。

2.米氏常数

3.专一性

酸性磷酸酯酶能广泛催化水解各种磷酸单酯与磷蛋白,但不能水解磷酸二酯。牛肺来源的酶能水解ATP与ADP,其他来源的酶还能作用焦磷酸。

4.抑制剂

酒石酸、氟化物、草酸、甲醛和Cu2+离子皆为抑制剂。

5.意义

患有前列腺癌者,其血清中酸性磷酸酯酶水平上升。按照Abul-Fadl和King推荐的方法可以分对前列腺专性的酶与其它非专一的酶,这是根据对不同类型的酸性磷酸酯酶进行选择性抑制作用来区分的。酒石酸能强烈抑制前列腺酶,但是,甲醛或Cu2+离子则能抑制红细胞酶。也曾试验了一些选择性底物区分各种类型的酶,Babson等已证明以β-甘油磷酸酯与a-萘酚磷酸酯作为前列腺酶的底物,较之以硝基苯酯与磷酸苯酯为底物更灵敏。

6.稳定性

血清中酸性磷酸酯酶是不稳定的,特别是当pH为中性与高温条件下则更不稳定。在25℃下,经1小时,将使前列腺来源的酶失活50%以上。可是,当加入柠檬酸或醋酸使pH降低,则稳定性有较大提高。然而,决不可加入F离子或草酸盐,因为这些物质皆有抑制作用。

二、测定方法

适用于酸性与碱性两类磷酸酯酶的各种测定方法,几乎不管采用哪种底物,酸性磷酸酯酶所需的pH值应为5,而碱性磷酸酯酶的pH值应为9。

采用邻-羟基苯磷酸酯底物,在m处测量由于水杨酸释放而出现的吸光率增值。

可使用对-硝基苯磷酸酯作为底物,来测定总磷酸酯酶与前列腺酸性磷酸酯酶活性。此法中,其中一份样品置于含有柠檬酸的试管中,另一份样品放在含有酒石酸的试管中,保温30分钟后,用分光光度法测量所释放的对硝基苯酚的量。由不加酒石酸的测定管为酸性磷酸酯酶总活性,而加有酒石酸的测定管为非前列腺酸性磷酸酯酶的活性。根据两管测定之差值即得出前列腺酶活性水平。

酸性磷酸酶能够在酸性环境中催化磷酸苯二钠生成游离酚,酚与4-氨基安替比林和铁反应生成红色亚醌衍生物,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值增加速率即可表征酸性磷酸酶的活性。

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