真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能显著提高体外转录的RNA的稳定性和翻译能力。的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
产品特点：本产品在合适浓度的加帽缓冲液（Cappingbuffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，效率可达到%，并且保证加帽方向正确。
质量保证：1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；3、光度测定法显示内毒素含量≤10EU/mg。
产品用途：1、可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应；2、可应用于mRNA的5’末端标记反应。
纯度验证
RNA酶残留定量检测
应用实例适用于10gRNA(I00nt)的加用反应，反应体系20L,且可根据实际需要放大。1.取10gRNA,用RNasefreewater将适量RNA稀释至15L；2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5min；3.按照表格依次加入各组分；4.37℃反应30min.5.RNA加帽完成，可进行后续实验.
应用实例本步骤适用于5′末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。1.用RNaseFreeWater将适量RNA稀释至14L；2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5min；3.按照表格依次加入各组分：4.37℃孵育30min；5.RNA5′端标记完成，可进行后续实验。*注：GTPMix为GTP和少量标记物，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。
产品信息
更多相关产品推荐：
