脲酶（UE）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/48样
产品简介：
脲酶（UE）广泛分布于植物的种子中，也存在于动物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能够水解尿素产生氨和碳酸，对尿素转化起关键作用。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N来反应UE活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前加3mL蒸馏水充分溶解；
2.试剂三：临用前将A液倒入B液中混合，待用；
3.标准品：1mg/mL氮标准液。用蒸馏水稀释至2μg/mL备用。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，g离心15min，取上清待测。
2.细胞/细菌：按照细胞/细菌数量（个）：提取液体积（mL）为-0：1的比例（建议万个细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，g离心15min，取上清置于冰上待测。
3.血清（浆）或其它液体：直接检测。
二、测定步骤
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至nm，可见分光光度计蒸馏水调零。
2.加样表：
三、UE酶活计算
1.液体中UE活力的计算：
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1μgNH3-N定义为一个酶活力单位。
UE（U/mL）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷V样÷T=0.×ΔA测定÷ΔA标准
2.组织、细菌或细胞中UE活力的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μgNH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（U/mgprot）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(V样×Cpr)÷T=0.×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2）按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1μgNH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（U/g质量）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(W×V样÷V提取)÷T=0.×ΔA测定÷ΔA标准÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1百万个细菌或细胞每分钟产生1μgNH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（U/cell）=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(细胞数量×V样÷V提取)÷T
=0.×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量
C标准液：标准液浓度，2μg/mL；T：反应时间，60min；V酶促：酶促反应体系总体积，0.14mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V提取：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量：以百万计。
注意事项：
ΔA测定大于0.6时，建议将反应混合液用蒸馏水稀释或者样本用蒸馏水稀释后在进行测定。
