前言
利用遗传学手段，以大肠杆菌作为模式生物来挖掘表型背后存在的机制，不可避免地会接触到大肠杆菌Red同源重组技术。利用同源重组技术可以摆脱限制性内切酶的酶切位点限制,而且可以方便有效地对复杂、较大的DNA片段进行改造和构建。今天我们带领大家来了解一下这其中涉及到的原理。
技术渊源
在大肠杆菌Red同源重组技术开发出来以前，利用PCRfragmentsflankedbyDNAhomologoustochromosome-mediatedgenereplacement（与染色体介导的基因置换同源的DNA侧翼PCR片段）来定向打断染色体基因的方法就已经在酵母和沙门氏杆菌中实现了。然而，在大肠杆菌中线性DNAfragments很难转化成功，这是由于大肠杆菌含有RecBCDenzymes（去氧核糖核酸外切酶）。RecBCDenzymes是细菌内源性重组系统的重要组成元件，既可以能够通过同源重组修复double-strandedDNAbreaks（双链DNA断裂），又可以降解线性dsDNA。因此，想要在大肠杆菌中实现外源线性dsDNA与染色体靶标序列的同源重组，就必须抑制细菌内源性的同源重组系统对线性dsDNA的降解能力。实际操作
在年，有学者研发出一种利用λ噬菌体同源重组系统在大肠杆菌细胞中实现外源线性dsDNA与染色体DNA同源序列之间发生重组的简单高效方法-Thephagelambda-derivedRedre