二胺氧化酶(组胺酶,DAO)是人类和哺乳动物小肠粘膜上层绒毛中具有高度活性的细胞内酶,在组胺和多种多胺代谢中起作用,其活性与粘膜细胞的核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
1.反应式
最适pH值为7~9,随底物而改变。
二胺氧化酶与组胺酶是同一类的酶。虽然已对豌豆苗中提取的二胺氧化酶进行了广泛研究,但是,仅有猪肾、血浆以及人胎盘来源的酶已被纯化。有人也提出了二胺氧化酶与组胺酶的差异,这是根据这两种酶对底物的选择性来区分的,动物和人唾液腺中的组胺酶优先作用组氨酸;猪肾、狗肾和豌豆苗来源的二胺氧化酶却能优先作用于腐胺与尸胺脱氨,这两类酶的命名编号均相同。
2.米氏常数
豚鼠肾中的二胺氧化酶以组氨酸作底物,测得的米氏常数Km值为5x10-6M。
3.专一性
此酶的专一性较宽,能与许多单胺、双胺和一些氨基酸起反应。豌豆苗中二胺氧化酶同1,4-二氨基丁烷与14-二氨基戊烷反应最为活泼,其次是亚精胺、鲱精胺、2-苯乙基胺、酪胺、n-乙基胺、n-庚基胺、n-丙基胺以及丁基胺等顺序起反应。
猪肾中二胺氧化酶能使腐胺、尸胺、鲱精胺和组胺等胺类进行脱氨作用。
4.抑制剂
某些重金属离子与巯基化合物皆能抑制二胺氧化酶。
5.纯度
这种低纯度的酶制剂,市场上已有供应。
6.意义
孕妇血清中主要表现出二胺氧化酶活性增高。胎盘中含有极高的二胺氧化酶活性,这是使血清中此酶活性水平升高的原因。二、三个月的正常孕妇血清中,二胺氧化酶的活性上升到最高水平,而后,在5~7个月期间趋于平稳状态。分娩后几天内,此酶活性重新恢复正常水平。若测量孕妇的二胺氧化酶的活性水平很高,这将是流产的预兆。患卵巢与子宫恶性肿瘤、以及支气管癌与过敏性休克等病例中亦观察到二胺氧化酶活性增加。患严重妊娠*血症孕妇的二胺氧化酶活性急剧下降,同时,出现组氨酸水平升高。
7.稳定性
此酶以干燥状态保存在4℃下,是很稳定的。
二、测定方法
一种高灵敏测定二胺氧化酶的荧光方法,系测量组胺或鲱精胺与酞醛反应的荧光消光值(disappearance)。此方法可测定组织中微量的二胺氧化酶活性或酶活性低的某些组织。
介绍了一种偶联的酶法测定方法:
于nm处测量NADH的吸光率下降速度即是二胺氧化酶活性的量度。此反应灵敏度高,专一性好,且测定简便。当二胺氧化酶的活性在25至毫单位范围内,其吸光率下降速度则成直性关系。
其它比色方法是:DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
或者按照荧光法测定过氧化氢与对羟基苯乙醇酸反应。后一种方法是极其灵敏的,能测定出10-4单位的酶活性。