胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种，EC3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。
一、概况
1.反应式
胰蛋白酶能水解多肽、酰胺、酯类等化合物，即作用于这些化合物中含有L-精氨酸或L-赖氨酸的羧基所构成的键。此酶反应的最适pH值约为7.8~8.5。
2.米氏常数
3.专一性
胰蛋白酶作用一些底物的反应性按此顺序递增，即多肽酰胺类酯类。此酶对于未变性的蛋白作用较慢。间-羟基苯酸酯与脂肪酯类亦可被胰蛋白酶水解。经变性的蛋白，诸如血红蛋白与酪蛋白能被此酶作用。
4.激活剂与抑制剂
Ca2+能提高此酶的活性，这是由于Ca2+离子可增加此酶的稳定性缘故。作为此酶的抑制剂有：有机磷化合物，胰脏中的天然多肽，大豆，利马豆以及卵蛋白(通称为胰蛋白酶抑制剂)，此外，尚有苯酰-4-胍基-苯甲酸酯与4-硝基苯酰-4-胍基苯甲酸酯。
5.稳定性
将此酶保存在pH2.3~3的溶液中，可稳定达几天时间，若以干粉状态保存在5℃下，则可稳定几个月之久。
6.意义
胰蛋白酶原经肠激酶作用，可转变成胰蛋白酶。测定血清制胰蛋白酶颇有困难，因为血清含有抗胰蛋白酶的因子。患急性胜腺炎与患胰腺瘤的病人,发现抗胰蛋白酶因子大大地增加。
测定十二指肠液中此酶活性水平，是诊断胆囊纤维变性疾制的理想指标。
二、测定方法
1.分光光度法
胰蛋白酶的活性可用变性的血红蛋白与酪蛋白加以测定。首先，加碱性的脲使蛋白变性，尔后，胰蛋白酶即可水解易溶于三氯醋酸的蛋白成份，因此，产生的酪氮酸与色氮酸含量可用Folin与CiocaIteu二氏方法加以测定，或者在nm处测量吸光率的变化值。前一种方法变化系数为3.5%；后一种方法变异系数为6%。已知的各种物质皆无干扰作用。
已采用的底物有N-对-甲基磺酰-L-精氨酸甲酯、N-苯酰-DL-精氨酸-B-萘酰胺、N-苯酰-DL-精氨酸-对-硝基酰替苯胺以及N-苯酰L-精氨酸乙酯，可按分光光度法跟踪胰蛋白酶水解速度。
还可以采用胰蛋白酶催化水解N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE)的酯键，生成N-苯甲酰-L-精氨酸(BA)，BA在nm处有吸收峰，通过测定nm吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。
2.荧光法
有文献曾介绍以苯酰-精氨酸-β-萘胺为底物测定胰蛋白酶。在此研究工作中，使用比色法测量由胰蛋白酶活性所产生的萘胺。使用这种底物发展了一种测定胰蛋白酶的高灵敏的荧光法。所测定的胰蛋白酶活性比较简单的表示方法是：相对于以1微克的结晶酶活性进行比较，亦可用动力学方法经保温1~5分钟即可测定出此酶活性。此法可测定极其微量的酶活性。荧光法是在激发波长为nm与发射波长为nm处进行测定的。
胰蛋白酶的酶解活性可用对-甲苯磺酰精氨酸甲酯盐酸盐(TAME)作底物进行测定，释放出的甲可借助各种方法来测定。
有文献采用荧光法测定酶促生成的甲醇，即将甲醇氧化为甲醛，进而使甲醛与乙酰丙酮聚合反应，然后与氨反应生成荧光团，此方法可测定出仅仅微克的胰蛋白酶，因而，可用来测定血清中胰蛋白酶活性。虽然，此底物并非是胰蛋白酶专一的底物，亦可被溶纤酶(plasmin)与凝血酶水解，但是通过对此反应体系中加入或不加胰蛋白酶抑制剂可对胰蛋白酶进行特效性测定。
介绍了一种测定胰蛋白酶的荧光法，系采用苯酰L-精氨酸-β-萘酰胺作底物。据报道该方法既反应简便，且更灵敏。