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TUhjnbcbe - 2025/1/3 17:34:00

年,Arthurkornberg首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶Ⅰ,(DNapolymeraseⅠ,简写DNApolⅠ)后来又相继发现了DNA聚合酶Ⅱ和DNA聚合酶Ⅲ。(DNapolymeraseⅡ,Ⅲ,简写DNApolⅡ,DNApolⅢ)实验证明大肠杆菌中DNA复制的主要过程靠DNapolⅢ起作用,而DNApolⅠ和DNApolⅡ在DNA错配的校正和修复中起作用。

这种酶的共同性质是:①需要DNA模板,因此这类酶又称为依赖DNA的DNA聚合酶(DNadependentDNApolymerase,DDDP)。②需要RNA或DNA做为引物(primer),即DNA聚合酶不能从头催化DNA的起始。③催化dNTP加到引物的3′桹H末端,因而DNA合成的方向是5′→3′。图16-9。④三种DNA聚合酶都属于多功能酶,它们在DNA复制和修复过程的不同阶段发挥作用。由于DNA聚合酶Ⅰ是研究得最清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点,所以我们着重介绍DNapolⅠ的作用并指出另外二种DNApol的特殊性:

1.DNA聚合酶Ⅰ:

DNApolⅠ是由一条多肽链组成,分子量为KD。酶分子中含有一个Zn++,是聚合活性必须的。

大肠杆菌每个细胞中约有个酶分子,每个酶分子每分钟在37℃下能催化个核苷酸参入到DNA链中,用枯草杆菌蛋白酶可将此酶水介成两个片段,大片段分子量为76KD,通常称为klenow片段,小片段为34KD。大小片段具有不同的酶活性。

(1)DNA聚合酶的5′→3′聚合活性:

这是DNA聚合酶最主要的活性,按模板DNA上的核苷酸顺序,将互补的dNTP逐个加到引物RNA3′桹H末端,并促进3′桹H与dNTP的5′桺O4形成磷酸二酯键,酶的专一性表现为新进入的dNTP必须与模板DNA碱基配对时才有催化作用,5′→3′聚合活性存在于klenow片段上

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