不同动物组织中总RNA的提取，实质上就是将动物组织细胞裂解，从而释放RNA的过程。
在进一步的研究中，我们高度依赖所提取的总RNA的质量。但RNA极不稳定，易于降解，而RNA酶几乎无处不在，且特别稳定，故在提取RNA时需最大程度地避免外源RNA酶的污染和抑制内源RNA酶的活力。
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因此，创造一个无RNA酶的环境，严格防止RNA酶污染是成功提取RNA的关键。
一、影响动物组织RNA提取的因素
1、RNA提取，要防止RNA酶对RNA的降解，包括：
（1）创造无外源性RNA酶的操作环境；
（2）抑制内源性RNA酶的活性；
（3）使用RNA酶的特异抑制剂。
（1）外源性RNA酶
外源性的RNA酶主要来源于与材料接触的实验器材和操作人员的呼吸、手接触等。因此，操作时涉及的器材必须抑制或灭活其上的RNA酶。
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a、实验器具
首先应当保证整个实验在超净工作台中完成。
其次，对于实验器材，应当将所有研钵、玻璃器皿及塑料耗材用含0.1%DEPC水浸泡12h后并经高温高压消毒处理，所用试剂需用0.1%DEPC处理过的消毒水配制，电泳槽用3%双氧水浸泡15min。
b、实验人员
实际操作过程中，手套是最容易污染样品的，因此手套要勤换。
实验操作人员说话过程中所带的唾液也会携带RNA酶，会导致样品的降解，故需带口罩操作。
实验人员熟练快速的完成整改RNA的提取，减少实验所用的时间，也可有效减少外源性RNA酶污染的几率。
（2）内源性RNA酶
图3：实验人员液氮研磨组织RNA，
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a、电动匀浆方法
将组织在RNA被大量降解前用电动匀浆器匀浆，彻底匀浆是提高获得率和降低降解的关键。
b、液氮碾磨法
组织在液氮研磨的过程中，RNA酶在低温环境中被完全抑制，减少降解。
但是，液氮碾磨方法非常麻烦，特别是碰到样品数比较多的时候更是如此。研究者不仅要把庞大的研钵进行高温处理，以灭活RNA酶，还要不厌其烦地取用液氮，一不小心就可能面临被液氮冻伤的危险。而且，一旦液氮添加不及时，组织就会化冻，导致RNA提取失败。
图4：组织在液氮中被研磨，
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（3）RNA酶抑制剂
现有的RNA抽提试剂，都含有快速抑制RNA酶的成分。在培养细胞中加入裂解液，简单的振荡，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的RNA酶，所以RNA得以保持完整。
而组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触，RNA酶的活性也就无法得到迅速充分的抑制。因此，如果在抑制RNA活性的同时使组织充分裂解，降解问题也就可以彻底解决了。
2、另外，在动物组织RNA的提取中，还涉及以下4个关键点：
（1）样品细胞或组织的有效破碎；
（2）有效地使核蛋白复合体变性；
（3）有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；
（4）对于多糖含量高的样品中牵涉到多糖杂质的有效除去。
二、动物组织RNA提取质量测定
提取的动物组织RNA质量，可以分别使用紫外分光光度计、OD/、琼脂糖凝胶电泳实验测定提纯后的动物组织RNA浓度、纯度和完整性。
1、动物组织RNA浓度、纯度测定
通过分析，使用凡知医学组织RNA提取试剂盒，可提取高浓度新鲜小鼠肝肾组织，紫外分光光度计浓度测定数据如下：
APPLICATION
数据展示
肝组织1
肝组织2
肾组织1
肾组织2
使用凡知医学组织RNA提取试剂盒，RNA纯度高，OD/1.8-2.0。
2、组织RNA完整性测定
使用凡知医学组织RNA提取试剂盒，最亮的28s条带是18s条带的2倍，提纯RNA完整性好。
另外，凡知医学组织RNA提取试剂盒具有高收率，无降解；无高分子量DNA污染（DNaseI处理）；适用多种样本类型；手工操作时间短等优点，适合提取新鲜组织、冷冻保存组织及RNALater组织保存液等。
参考文献：
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