土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。
测定原理：
利用钼蓝法定磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成nm有特征吸收峰的物质，通过测定nm光吸收，即可计算出无机磷含量。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。
需要的仪器，耗材:
1、可见分光光度计/酶标仪
2、台式离心机
3、可调式移液器
4、微量石英比色皿/96孔板
5、研钵、冰和蒸馏水。
6、℃高温电炉
7、30-50目筛
8、目筛
产品组成：
实验步骤：
一、样本处理：（具体比例可以参考文献）
1.无机磷
称取通过30-50目筛子的风干土样0.01g，转移到1mL离心管，加入1mL试剂R1，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，rpm，离心10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
2.总磷提取
取通过目筛子的风干土样，℃灼烧1h，冷却后称取约0.01g，转移到1mL离心管，加入1mL试剂R1，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，rpm，离心10min，取上清液二，用于总磷含量测定。
二、试剂准备
1、试剂R3
临用前配制，加入8mL蒸馏水，充分溶解后加入4mL试剂R2，混匀；配好的溶液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，该试剂应现配现用。
2、标准品
40μg/mL无机磷标准品。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
三、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到nm，蒸馏水调零。
2、打开水浴锅，调节温度到40℃。
3、空白管
取EP管，依次加入μL蒸馏水，μL试剂R3，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于nm测定吸光度，记为A空白管。空白管只需做1-2次。
4、标准管
取EP管，依次加入10μL标准液，90μL蒸馏水，μL试剂R3，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于nm测定吸光度，记为A标准管。标准管只需做1-2次。
5、测定管
取EP管，依次加入10μL上清液一或者上清液二，90μL蒸馏水，μL试剂R3，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于nm测定吸光度，记为A测定管。
四、土壤磷含量计算
1.土壤无机磷含量（μg/g土样）=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
W：土壤样本质量，g；
V总：上清液一总体积，1mL。
2.土壤总磷含量（μg/g土样）=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W
W：土壤样本质量，g；
V总：上清液二总体积，1mL。
3.土壤有机磷（μg/g土样）=土壤总磷-土壤无机磷
注意事项：
1、试剂R3配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。
2、如果吸光值大于1时，样本需用蒸馏水做相应稀释。
3、空白管和标准管只需测定1-2次。
4、需在40min内完成比色。