我们的FlexStation3多功能酶标仪是一个集多种检测于一身的平台,它提高了液体操作通量及生化、细胞动力学测定的灵活性。在微孔板的上下两侧都具有先进的双光学系统,可检测光吸收、荧光强度、荧光偏振、化学发光和时间分辨荧光。通过利用高度集成的流体学技术,此酶标仪可任意添加来自96或孔板中的检测试剂而无需在您的实验当中做任何妥协。通过5种光学检测模式和程序化的板到板液体操作,您可以创造出新的快速测定。
血小板钙流测定的发展
血小板是一种体积小、无核的血细胞,通过在血管损伤位置聚集形成血栓(或凝块)来减少血液流失以达到止血的效果。当血小板对血管损伤异常应答时,就会导致血栓形成疾病如心脏病发作和缺血性中风。
胞内Ca2+是血小板功能的主要调控因子并在血栓形成疾病中发挥重要作用,但是却难以在脆弱的人类血小板中检测。这里描述了使用FlexStation3酶标仪能够精确和快速的测定激动剂EC50和拮抗剂IC50,也能支持利用基本人类组织的中等通量新药筛选。
血小板胞内Ca2+变化的实时动态学检测提供了丰富的数据信息
能够进行微量测定,从比色皿到面积孔板减少血小板和化合物的使用
FlexStation3酶标仪中板载移液器提高了孔与孔的重现性和测定的稳定性
Fura-2,AM-装载的人类血小板中ADP(),U()和CRP-XL()的浓度-应答曲线。数据是来自5个独立实验的meanvalues±sem,n≥10在8个不同浓度GRB()存在下U()和U(EC80浓度)的平均浓度-作用曲线。数据是来自5个独立实验的meanvalues±sem,n≥10FlexStation3酶标仪使用Fura-2,AM测定血小板Ca2+测定工作流程
hERG通道阻断剂的特性
药物导致的人类ether-à-go-go-相关基因(hERG)离子通道的抑制已被证实与潜在的易患严重室性快速型心律失常和扭转型室性心动过速病人有关。近些年,一批FDA认证的药品被从市场上撤回原因是对hERG并未达到效果。因此,在药物探索过程中对那些可以早期阻断hERG通道的化合物的识别的需求不断上升。这里我们展示了在FlexStation3酶标仪上利用我们的FLIPRPotassiumAssayKit来检测hERG化合物活性。
在细胞水平对K+通道活性的功能性检测
均相免洗步骤减少孔与孔之间的差异并简化了工作流程
相对于非均相测定具有扩展的信号窗口
可阻断hERG通道活性的代表性化合物的浓度相应曲线。数据来自FlexStation3酶标仪上的测定。FLIPRPotassiumAssayKit工作流程
检测受体介导的[Ca2+]i
钙离子(Ca2+)是从细菌到专门的神经元细胞里最为常见的信号转导元素。胞内阳离子浓度变化的检测如Ca2+在理解许多细胞过程机制中都是非常重要的。FlexStation3酶标仪整合了灵敏的光学系统、液体转移系统和温度控制使之成为理想的检测动力学和细胞水平的荧光测定工具,例如胞内钙离子、膜势能和胞内pH的检测。
多用途酶标仪针对动力学、细胞水平荧光测定,例如胞内钙离子、膜势能和胞内pH的检测
通过监测Gq偶联的GPCRs钙动员测定数据可靠且重现性良好
遮蔽技术使信号增强5倍
FLIPR钙离子测定原理。FLIPRCalciumAssayKits包含一种钙敏感的的染料可在孵育过程中进入到细胞质中。这一细胞浸透遮蔽染料可在胞外维持并阻挡背景荧光。一旦配体结合受体,钙离子便释放到细胞质中。这一染料结合胞内钙离子且检测荧光信号增强。ATP伴随荧光信号增强。ATP浓度(x-轴)对荧光信号增强(y-轴)图。数据是mean±s.e.mean。
双荧光素酶报告基因的检测
报告基因测定在真核基因表达的研究中是很有用的工具。来自Promega双荧光素酶报告基因系统利用萤火虫和海肾荧光素酶不同的发光特性使带有内参的实验报告基因的活性标准化。具有液体转移功能的FlexStation3酶标仪提供了一个可增加这一重要闪烁化学发光测定通量的坚实平台。此平台通过移液和读取同时进行的方式实时快速动态测定。
简单的改变8和16通道移液头即可测定96和孔板
多种添加方式可实现相同孔里既添加激动剂又添加拮抗剂
测定可轻松的通过对用户定义的添加和研磨参数进行优化
和注射器相比,极低的死腔量节省了宝贵的试剂
添加后在孔中研磨促进了低体积测定的充分混合
双荧光素酶测定原理。上图展示了萤火虫和海肾荧光素酶的反应。萤火虫酶催化依赖ATP、Mg2+和O2的荧光素氧化并伴随发光。海肾荧光素酶催化依赖O2的腔肠荧光素(腔肠素)的氧化,但是不需要Mg2+和ATP。在孔板模式下,在移取每种试剂后附加了一个研磨步骤增加了低浓度荧光素酶的线性。萤火虫荧光素酶LLD=0.72attomoles,R2=0.99和海肾荧光素酶LLD=0.57Attomoles,R2=0.。在孔板模式下,在移取每种试剂后无研磨步骤。萤火虫荧光素酶LLD=0.69attomoles,R2=0.和海肾荧光素酶LLD=40attomoles,R2=0.。海肾荧光素酶的线性在低浓度下因为缺乏混合而受到影响。
石楠发光钙动员测定的比较
在哺乳动物细胞中,钙离子激活的发光蛋白对于检测包含钙动员的受体介导的信号转导事件是非常重要的工具。发光蛋白的一个主要优势在于一旦钙离子结合到腔肠素-发光蛋白复合体上就会立即产生闪烁发光。石楠检测的背景信号接近零,因此具有高的信噪比。此外,光的释放是由腔肠素的氧化而非光激发产生的,排除了自发荧光的问题。
这一研究利用FlexStation3reader为进行石楠的钙流测定和在各种细胞浓度下检测贴壁CHOmito-Photina/H3细胞中的IMETIT浓度应答提供了一个基本的方案。
为药物研究过程中早期识别先导化合物提供灵活的解决方案
允许在96或孔板中一次一列的实时检测细胞水平的荧光和化学发光
SoftMaxPro软件中预配有水母素测定方案
CHO-H3石楠细胞滴定。CHOmito-Photina/H3细胞以各种细胞浓度在孔、黑色壁、透明底孔板铺板((蓝),(红),(绿)和(橙)细胞/孔)。FlexStation3系统在实时化学发光检测中添加激动剂。结果是大约16次重复的平均值。
钙离子信号转导的检测
FLIPR钙离子检测试剂盒使用钙离子敏感的指示剂和专利的掩蔽染料使您能够进行高灵敏的G蛋白偶联受体(GPCRs)、离子通道和其他钙敏感目标的荧光筛选。通过利用一种新的染料构想进一步加强钙流测定信号窗口、增加测定稳定性同时提供更为灵活的检测方案。因此,FLIPR钙6和钙6-QF钙离子试剂盒染料加上中间通量的FlexStation3酶标仪16通道移液器,使在孔板中测定钙流变的更为合适。
比起其他钙离子试剂盒和染料,可提供更大的信号窗口
能够进行低信号筛选,包括内源的、原代的或干细胞目的物
具有专利的一步法掩蔽技术可明显降低细胞外背景
对组织离子转运体的耐受减少了阴离子再摄取抑制剂的需要
FLIPRCalcium6和6-QFAssayKits提供了最大的信号窗口。组胺H1在Hela细胞中是一种内源性受体。FLIPRCalcium6和6-QF与其他染料比较显示具有最大的信号窗口。EC80的值是在一半log和Z因子下可比的。Hela细胞中利培酮拮抗剂对组胺挑战的应答。利培酮是一种抗精神病的药物用来治疗精神分裂症。它是一种多巴胺拮抗剂,也具有抗组胺的特性。来自Calcium6和6-QF的染料信号为拮抗剂测定提供了最大的窗口。IC50的值是在其他各个一半log内并且Calcium6-QF在IC50浓度下具有最高的Z因子。Hela细胞中嘧啶胺拮抗剂对组胺挑战的应答。嘧啶胺是第一代组胺H1拮抗剂。因为由FLIPRCalcium6AssayKits提供的更大的信号窗,IC50的Z因子是最大的。另外,Calcium6-QFkit同样提供了出色的测定,它不需要在淬灭所研究的敏感的目的物时进行冲洗。FLIPRCalcium6Assay染料不需要使用阴离子重摄取抑制剂。对CHO-M1细胞和Calcium6染料的测定说明对碳酰胆碱的应答不需要与丙磺舒孵育。Fluo-4Direct的相关性测定显示几乎没有信号。Calcium6染料是了解对阴离子重摄取抑制剂敏感的目的物的一种重要的新的方法。
使用冷冻CHO细胞的毒蕈碱M3-受体测定的优化
基于细胞的检测经常会被被挑战并耗费时间。为了简化这一复杂过程,可对冷冻细胞检测,它不用先做细胞培养,所以越来越频繁的成为持续生长培养细胞的替代方法。FlexStation3酶标仪结合FLIPR钙5检测试剂盒非常适合检测表达毒蕈碱M3受体的冷冻CHO细胞内Ca2+的变化。双单色器使得激发发射波长的选择变的简单,且同时支持单波长和双波长比率指示剂的使用。
多用途测定提供了广阔的应用,覆盖整个生物学目标
均一的格式减少平板操作并提供更高的通量
多通道液体操作使同时进行激动剂和拮抗剂研究的设置简单轻松
动力学追踪。在FlexStation3酶标仪上对CHRM3细胞使用FLIPRCalcium5AssayKit,ACh(nM)这一典型动力学追踪由SoftMaxPro6软件导出,细胞情况为持续培养的细胞(黑)、融化后使用18小时的冷冻细胞(红)或冷冻细胞(蓝)。图表展示的是y轴在基线上的应答百分比对x轴以秒为单位的时间。激活/抑制曲线。对CHRM3细胞使用FLIPRCalcium5AssayKit,ACh±p-F-HHSiD激活/抑制曲线。细胞情况为细胞情况为持续培养的细胞(黑)、融化后使用18小时的冷冻细胞(橙)或冷冻细胞(蓝)。
FlexStation3多功能微孔板读板机配置
我们提供丰富的耗材和检测试剂以满足您对研究所需的应用灵活性。