大家好，又见面了！本期所讲的是ELISA结果用酶标仪读取之后的分析步骤，有些酶标仪软件自带分析功能，但是需要麻烦的设置步骤，本期教大家用EXCEL软件处理酶标仪读数求出样本的浓度值。
在ELISA实验结束后，酶标仪检测出的是标准品和样本的OD值。其中，标准品的浓度说明书中已知，我们用标准品的OD值及其相对应的浓度来绘制标准曲线以推算样本的浓度。以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。这样，我们把样本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即样本浓度。
1.首先，将数据整理好输入Excel，分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。
2.将每孔吸光度值减去空白孔吸光度值，即为校正后的吸光度，实验孔也要校正。
3.拖动鼠标选取完成的数据区，并点击插入菜单，在图表类型中选“XY散点图”，并选择子图表类型的“散点图”（第一个没有连线的），如下图所示。
4.选择散点图后会自动生成下图，右键点击任意一点弹出的对话框里选择“添加趋势线”。
5.在趋势线选项中选择“显示公式”和“显示R平方值”，公式即为吸光度值和浓度值的换算关系和相关系数。不同品牌和指标的标准曲线拟合方式不同，根据厂家提供的说明书选择恰当的拟合方式。本例中拟合方式为线性，相关系数为0.，越趋向于1说明曲线拟合度越好，可信性越高，一般应大于0.95。
6.我们将样本的OD值作为X代入上述方程，求出来的便为浓度值了。
附ELISA血清标本的采集和保存要求：
1.ELISA试剂盒血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。
2.一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，超过一周测定的需－20℃保存。
3.冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。
4.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
5.ELISA试剂盒反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；
6.最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；
7.并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；
8.EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；
9.血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。