微孔板检测仪又称酶标仪,现已成为许多实验室必备的高通量检测设备,有多种检测模式,最经典的是光吸收、荧光和化学发光检测三种,可对以微孔板为体系的多种实验应用进行检测。
除了最常用的ELISA、蛋白定量检测外,微孔板检测也可以用于细胞生物学、酶、核酸、微生物等多种应用,快来挖掘潜能!
细胞活性/活力检测代谢活动通常被用作细胞生存能力指标,常通过测细胞还原电位或膜通透性评估。MTT、XTT、alamarBlue、PrestoBlue都是极好的活性检测试剂。
推荐试剂:
alamarBlue?操作简单,免裂解,无*性,适用广泛可测哺乳动物细胞、植物、细菌、真菌等;
PrestoBlue?超快速检测最短10min,可活细胞实时多点检测,多色分析;
MTT比色法分析;XTT反应为可溶性产物,多点检测,高动态范围;
LIVE/DEAD?测活细胞占比,双色荧光快速,灵敏度高,还有可检测细菌、酵母菌的;
LDH检测细胞悬液或上清,测吸光度;
细胞增殖检测细胞增殖是细胞生长和分化研究的关键,常基于平均DNA含量或新DNA合成检测。
推荐试剂:
CyQUANT?系列是基于DNA含量的荧光微孔板法,更准确,多时间点检测;
EdU是非常小的胸腺嘧啶核苷类似物,可快速精准测定新合成DNA,比传统BrdU更温和无需变性或酸处理;
细胞凋亡(Caspase)检测细胞凋亡早期的一个显著特征是Caspase酶的激活,参与蛋白剪切和细胞解体,微孔板检测可以对活细胞和细胞裂解液或提取物中的活性Caspase。
推荐试剂:
CellEvent?系列对活细胞实时多点检测,可多色荧光分析,仅孵育30min即可;
酶活性检测酶活性是微孔板检测的另一大类应用,可检测蛋白酶、胶原酶、胰肽酶、溶菌酶、逆转录酶、β-半乳糖苷酶等。
推荐试剂:
代谢产物及分析物检测微孔板检测可以灵敏的检测各种代谢分析物,包括葡萄糖、半乳糖、胆固醇、谷氨酸、*嘌呤(或低*嘌呤)、尿酸、胆碱和乙酰胆碱以及过氧化氢。
推荐试剂:
Amplex?Red发射光为红色,样品中自荧光干扰很小,信号对pH或还原剂的敏感性很小;
核酸定量检测微孔板检测也可以定量分析核酸,精确高效的核酸定量对于需要精确测量的珍贵或难处理样品的分子生物学实验室来说至关重要。
推荐试剂:
Quant-iT?技术可与特异性DNA、RNA或蛋白质结合后,其荧光强度增加数百倍,信噪比极高,与吸光度法相比,灵敏度增高达倍。
另外,微孔板检测还可以细胞信号及脂类、活性氧/氧化应激、胞内离子等进行分析。
荧光微孔板检测优化指南向下滑动查看1.选择最合适的荧光激发和发射波长。检测试剂与仪器之间的光谱匹配度较差时,会导致大量信号丢失。
2.调整仪器灵敏度设置以最大限度增强荧光信号。要达到最大的线性动态范围,需选择最高增益或灵敏度设置以同时适于预期检测值的最低值和最高值。
3.实验使用同样的检测体积。检测体积的微小差别也会导致信号的极大差别。为得到可靠的测量结果,请确保使用仪器制造商所推荐的最小体积或更大体积的产品。
4.完全彻底地混匀样品。混匀不充分会导致聚集、沉淀,并引起反应速率不同或分析物和检测试剂的孔间浓度差异。
5.一定要避免产生气泡。气泡会导致光散射和错误信号,可以对微孔板进行短暂离心,或在配制溶液前进行脱气处理,还可使用移液器吸头吸出较大气泡。
6.制备重复样品。重复分析可以提高检测的精确度。
7.避免“边缘效应”。含有合适荧光基团的溶液可用于确定微孔板所有孔获得的荧光信号间的一致性。若在微孔板边缘板孔中发现了信号差异,可引入合适的校正因子或不使用这些孔。
8.隔离明亮样品。在透明微孔板中,含强荧光的样品会影响到邻近孔中的信号(又叫孔间串扰)。可在强荧光样品周围留下空的或空白对照的孔,或在邻近板孔中加入具有相似荧光强度的样品。还可使用白色或黑色的微孔板。
9.避免样品发生光漂白。不到万不得已,绝对不要重复检测同一个样品,也不要重复检测标准品,因为在荧光检测过程中某些试剂可能会发生严重的光漂白。
10.样品浓度需要在检测范围内。对于未知样品,可尝试不同的梯度稀释倍数。
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