操作视频
呕吐*素ELISA快速检测试剂盒
北京华安麦科产品市场部张经理：
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准备工作
实验开始前，检查准备实验所需设备及试剂，试剂盒需从冷藏环境中取出，置于20-25℃平衡1h以上，酶标仪开机预热
样品前处理
打开电子天平，放上称量纸，去皮清零
称取经过充分混匀的粉碎后的小麦样本5（±0.01）g，转移到做好标记的50ml离心管中
用移液管移取25ml去离子水加入到盛有样本的离心管中，盖紧离心管盖
在涡旋振荡器上剧烈振荡5min，转速为rpm，振荡时样本应与提取液充分混合
振荡后静置3min
准备好过滤所需新的离心管和定量滤纸
将静置过的样品与提取液混合物用定量滤纸进行过滤，弃掉前三滴，收集上清液
过滤时可在滤纸侧面插入一个枪头，方便空气进入，加快流速
取用一个7ml带塞离心管做好标记，用-0ul移液器取4ml去离子水加入到离心管中
再取1ml过滤后得到的上清液加入到离心管中，注意实验中必须使用一次性枪头，吸取不同试剂时需更换
盖紧离心管盖，手摇5s，得到待检液体
检测步骤
取出回温好的酶标板
用10-μl移液器取50μl各浓度的标准品及1:4稀释后的待检样品液（斜贴壁45度）加入到微孔中，每种液体点双孔
加每种液体前先润洗枪头2-3次，减少误差
实验中所有移液均采取反向移液（吸二打一），每次吸取不同试剂需注意更换枪头，避免交叉污染
加入酶标物50μl/孔
再加入抗试剂50μl/孔
轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后做好标记，置于25℃避光环境中反应15min
在反应期间，可进行洗液配制和酶标仪模板设置
用量筒量取45ml去离子水
再用-0μl移液器取5ml浓缩洗涤液加入到去离子水中
充分混匀，得到工作浓度洗涤液
点击酶标仪主页面左侧面的项目，点击新建
输入模板名称，主波长和次波长分别为nm和nm，纵向布板
拟合算法为CS算法，标准品个数为5个，浓度单位选择ppb，点击下一步
标准品设置自动重复次数为2，依次输入各标准品浓度，点击下一步
进行样品设置，输入样品个数，重复次数为2次，稀释倍数为1倍，点击下一步
点击标准品，设置标准品位置，点击样品，设置样品位置，点击完成
点击测量，选择要使用的目标模板，等待测量
取出反应到时的酶标板，进行洗板
小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干
用-0μl移液器取μl配制好的工作浓度洗涤液（垂直悬空）加入到各微孔中
轻轻振荡混匀，甩干
重复洗板5次，每次间隔10s
用毛巾和吸水纸包裹，进行拍干，检查有无气泡，拍干后如有气泡可用未使用过的枪头戳破
用10-μl移液器取μl底物液加入到各微孔中
盖上盖板膜，置于25℃环境中避光反应5min
小心揭开盖板膜，用10-μl移液器取50μl终止液（垂直悬空）加入各微孔中，终止反应
放入酶标仪，点击开始检测，等待测量结果
打印OD值和结果
注意事项
1、试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准品的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（/nm）值小于0.5（Anm0.5）时，表示试剂可能变质。
8、加入底物液后，一般显色时间为5min。若颜色较浅，可延长反应时间到7min。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
北京华安麦科生物技术有限公司
市场部：（张经理）
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