基因功能研究思路，简单来讲是在进行芯片或者测序得到基因后，筛选肿瘤组织与正常组织之间的差异表达基因。下一步即肿瘤细胞中进行目的基因的沉默与过表达，探究这些基因在肿瘤发生过程中的作用。
之前为大家介绍了过表达质粒选择（点击进入），今天为大家介绍过基因表达的技术中目的基因获取。
首先，根据目的基因CDS序列的长短，可以通过两种方法获取目的基因序列：
（1）设计CDS引物，通过提取组织RNA，并设计相应引物，运用PCR的方法获得目的基因CDS序列，连接到克隆载体后，挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低，但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。
（2）全基因合成：根据目的基因的CDS序列，直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确性高，相对成本会高一些，需要专业的合成公司完成。适合基因CDS序列较长或者人工改造的任何基因序列。有些公司会将目的CDS序列连接至克隆质粒载体上，此时我们可以通过两种方法获得：A：CDS两端限制性内切酶进行酶切，将酶切后片段通过胶回收方式连接至载体。B：设计引物将CDS区通过PCR方法获取，注意如果序列较长，最好使用高保真酶，防止PCR过程中碱基突变。
下面以人类基因为例，介绍下第一种方法中目的基因的获取。
1目的基因的CDS序列获取
1.进入NCBI数据库（