二、实验原理
a-淀粉酶和β-淀粉酶,各有其一定的特性,如β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而a-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下则发生钝化。通常提取液中同时有两种淀粉酶存在,测定时,可根据它们的特性分别加以处理,钝化其中之一,即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15min以钝化β-淀粉酶,便可测定a-淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以处理,钝化a-淀粉酶,以求出β-淀粉酶的活性。淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团,在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比,故可求出麦芽糖的含量。以单位时间内麦芽糖减少的毫克数表示淀粉酶活性的大小。三、实验器材及试剂
1.材料:萌发的小麦(芽长1厘米左右)2.仪器:小台秤、研钵、容量瓶、具塞刻度试管、试管、刻度吸管、离心机、恒温水浴、分光光度计。3.试剂:(1)1%淀粉溶液(2)0.4NNaOH(3)pH5.6的柠檬酸缓冲液(4)3,5-二硝基水杨酸:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g溶于20mLIN氢氧化钠中,加入50mL蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后,用蒸馏水稀释至mL,盖紧瓶塞,勿使二氧化碳进入。(5)麦芽糖标准液:称取麦芽糖0.g溶于少量蒸馏水中,移入mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。四、实验步骤
1.酶液的提取2.α-淀粉酶酶解液的制备取试管4支,注明两支为对照管,两支为测定管,参照下表加入试剂。3.α-及β-淀粉酶酶解液制备取酶提取液2-6mL(具体使用量根据预实验确定)稀释定容至mL。取试管4支,注明两支为对照管,两支为测定管,参照下表加入试剂。4.麦芽糖标准曲线的制作取25mL刻度试管7支,编号,参照下表加入试剂。5.酶活力的测定生化云老师