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TUhjnbcbe - 2021/6/7 14:05:00

细胞实验技术交流

之细胞培养仪器及功能简介

细胞间的组成一般分为准备区,制备区,贮存区和无菌区4个区域。

准备区的主要功能是进行清洗、消*、准备工作;制备区主要是用来进行培养基、试剂配置;贮存区则是用于细胞库及物品存放;无菌区是实验人员进行更衣缓冲及操作培养的地方。而细胞培养过程中就功能分类又可以划分为细胞培养、贮存、配液和灭菌4个部分。

一.细胞培养仪器及简介

细胞培养一般采用垂直流超净工作台,正压状态,气体外泄,只保护操作对象,而不保护工作人员和实验室环境。

紫外照射实现杀菌功能,紫外灭菌(表面)+臭氧灭菌(死角,挡板关闭),每次紫外照射20-30min,鼓风10min后使用(注意培养室换风),洁净度达到百级。

紫外灯在小时后功率会将至原来的70%,及时更换上方的粗滤布定期拆下清洗。

(超净工作台)

负压状态,气体不外泄,既保护样品,更侧重于保护操作人员和环境,二级安全细胞,携带病*(如hele/kB),原代培养的临床人源样本(真菌),慢病*相关实验。

(生物安全柜)

CO2钢瓶主要用于CO2气体的贮存。在细胞培养的过程中大多数细胞都是需要在CO2含量为5%的条件下进行的,CO2钢瓶主要连接培养箱用于CO2含量的稳定维持。

(CO2钢瓶)

倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生,如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。

(倒置显微镜)

离心机是利用离心力对混合液(含有固形物)进行分离和沉淀的一种专用仪器,主要用与制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。细胞培养中的离心速率一般为xg(约rpm),5-10min,过高的转速,将造成细胞死亡。根据不同需求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。

(台式离心机)

CO2是细胞的代谢产物,是细胞生长的必需成分,又与维持培养液的PH相关。细胞培养中,O2、CO2都是细胞生长的必要条件,CO2培养箱有干式与湿式,培养条件一般设置为37℃,5%CO2。CO2培养箱水盘的水防止污染的方式采用无菌水+定期2周更换+防腐剂(0.02%叠氮钠或者2%硫酸铜。

(CO2培养箱)

细胞计数器是集计数、统计、显示为一体的微电脑控制的计数仪器、计数准确可靠、使用方便。

(细胞计数板(器))

移液器的主要作用是在细胞培养的过程中进行培养基等液体的吸取和移除。在细胞培养过程中用到的主要量程由10ul/ul/ul/ul组成。

(RAININ移液器)

二.细胞贮存仪器及简介

细胞培养过程中的培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品需要保存在4℃或者-20℃中,可短期保存组织样本。

用于细胞冻存需要在-80℃过夜,还用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。

(超低温冰箱)

液氮的温度:液相:-℃,气相:-℃。液氮罐主要用于细胞的长期贮存,细胞种子的留存。

污染:冻存管存在泄漏的可能,细胞不能与其他样本共用一个液氮罐。

(液氮罐)

细胞冻存有两种方法:传统的方法是利用冻存管处于4℃、-20℃、-80℃保存,程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃,最后再放置到液氮槽中长期保存。

程序降温盒的使用经验(仅供参考):虽然梯度降温的起始点是室温20℃左右,但是冻存液里面的DMSO对细胞有*性,尤其是室温的时候,所以冻存盒和冻存液先预放至4℃,等把细胞用冻存液重悬好了放入冻存盒后,立刻转移至-80℃冰箱,第二天再转移至液氮,冻存盒中的异丙醇应使用5-7后更换一次,而且保证液体量不低于ml刻度线,否则降温效果会受到影响。

异丙醇:无色透明具有乙醇气味的可燃性、有*液体,熔点是-87.9℃。请注意其可燃性!

(程序降温盒)

恒温水浴锅广泛应用于干燥、浓缩、蒸馏、浸渍化学试剂、浸渍药品和生物制剂,也可用于水浴恒温加热和其他温度试验,是生物、遗传、病*、医药、卫生、生化实验室、分析室教育科研的必备工具,其主要特点是温控精确,有数字显示,自动控温,操作简便,使用安全。

(水浴锅)

三.配液

细胞培养过程中会涉及到药物及试剂的配制过程,在这个过程中涉及到0.22um滤膜、滤器、天平和磁力搅拌器等仪器,用于试剂的称量和过滤除菌。

四.灭菌

高压蒸汽灭菌锅属于高压蒸汽灭菌器之一,它具有耐高温、高压、不怕潮湿等优点。广泛适用于医疗、科研、食品等单位对手术器械、玻璃器皿、药液、培养基等物品进行灭菌,成为灭菌的得力助手。

常规灭菌条件为℃,30min。

(高压灭菌锅)

用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用。细胞培养多数耗材为一次性耗材,移液器枪头灭菌后需要用干燥箱进行烘干水分后才可使用。

(干燥箱)

以上介绍了细胞实验中要用到的细胞相关通用仪器,但是根据自己的需要可以额外选配一些仪器,例如:用于废液吸取的吸液泵,药液配置的电动移液器等。

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