大肠杆菌能生产糖蛋白吗？
干扰素有两种类型,一种是天然干扰素；另一种是重组干扰素,是通过基因工程技术生产的。研究表明，以基因工程和发酵工程为手段,用大肠杆菌生产出来的干扰素是没有糖链的,化学本质虽不是糖蛋白,但同样能够抑制病*在细胞内的增殖,增强T、B淋巴细胞的功能,加强巨噬细胞的吞噬作用和对癌细胞的杀伤作用,也是干扰素。
真核细胞给蛋白加上糖链后,能够帮助蛋白折叠成正确的构像,同时糖链有助于蛋白质的溶解,防止蛋白聚集沉淀,从而能使糖蛋白分泌到细胞外。而在大肠杆菌表达的非糖基化蛋白常常会聚集成不溶性的包涵体。一方面,包涵体中的蛋白是没有生物活性的,需要通过后续的溶解、纯化、复性等使其变成有生物活性的蛋白[1]；另一方面,一些糖蛋白在去除糖链后尽管仍具有一定的生物活性,但是易被蛋白酶降解。因此,真核细胞表达的干扰素需要糖链来稳定结构、帮助溶解,并通过转运系统分泌到细胞外,以达到抗病*、抗肿瘤的功效。
目前科学家发现某细菌里存在生产糖蛋白的基因簇,科学家用基因工程方法将这套基因簇克隆至大肠杆菌内进行表达,使得大肠杆菌也能够生产出相应的糖蛋白[2]。
[1]夏启玉,肖苏生等,邓柳红..包涵体蛋白的复性研究进展[J].安徽农业科学,36(14):～
[2]王宏华,凌红丽..乳糖诱导重组鸡γ干扰素基因在大肠杆菌中的表达[J].中国动物检疫,25(6):25～27
蛋白质的分离纯化有哪些方法？
蛋白质的分离方法除了教材介绍的凝胶色谱法之外，还有以下几种方法：
1、粗提取方法有盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法[1]；
2、离心法有差速离心法、密度梯度离心法[1]；
3、精提取方法有离子交换层析、疏水相互作用层析、置换层析、亲和层析、高效液相色谱、聚丙烯酞胺电泳、等电聚焦电泳[2]、毛细管电泳；
4、此外，还有双水相萃取技术、浊点萃取法、反胶团萃取等方法[1]。
迄今为止，我国还没有研究单一的蛋白质分离方式，不能利用合理的措施提升其纯度与分离效果。还需要利用物理与化学方式对其分离处理，在多种方法联合的情况下，确保蛋白质的分离纯化符合规定。
[1]张向阳主编.医学分子生物学[M].南京，江苏凤凰科学技术出版社,.02：-.
[2]HeyJ，PoschA，CohenA，etal.Fractionof