蛋白质相互作用的组成和动态是细胞过程所有方面的基础。与其他检测植物蛋白质相互作用的技术相比，荧火素酶互补技术具有许多优点：它可以实时检测植物蛋白质-蛋白质相互作用，几乎无需动手操作样品，高度定量，背景极低，并且可以很容易地扩大规模以进行高通量交互组研究。年4月2日中国科学院周俭民研究团队在CP发表了一篇名为“LuciferaseComplementationAssayforProtein-ProteinInteractionsinPlants”的文章揭示了利用荧火素酶互补技术分析了植物中蛋白质-蛋白质的相互作用。荧火素酶互补试验，也称为分离荧火素酶分析，最初是在活的哺乳动物细胞中发展起来的，但后来被用于植物蛋白质相互作用的研究。在这个实验中，荧火素酶被分裂成N端和C端片段(NLuc和CLuc)并翻译融合到两种蛋白质上。这些片段具有酶活性，两种蛋白质的相互作用导致了空间上的紧密接近，从而恢复了酶的活性。这导致通过荧火素酶底物的氧化而发射光，并且光可以由光度计或植物活体成像仪（CCD）直接检测。迄今为止，这种方法已被广泛用于各种蛋白质互作研究。在这里，我们描述了一种基于农杆菌介导的荧火素酶在烟草中瞬时表达的荧火素酶互补分析方法，该方法可定量定性分析体内蛋白质-蛋白质相互作用。该实验共包括四个主要部分。首先，将基因编码到目标质粒中，包含克隆和成功编码的序列，并在农杆菌中引入终止质粒。其次，将含有这两种质粒的农杆菌侵染到植物叶片中，使重组DNA进入植物细胞并在植物细胞中表达。然后获得被测表达蛋白质的叶组织，测试它们在黑暗中的发光，作为蛋白质相互作用的指示。最后，提取总蛋白，然后进行SDS-PAGE分析，再进行WB分析，以确定含有特定抗体的受试蛋白的数量。
CCD成像系统检测蛋白质互作的实例
如果检测到低发光信号，有必要排除这是由于缺乏蛋白质表达引起的可能性。此外，在检测动态蛋白质相互作用时，有必要进行WB分析以确认发光信号的减少或增加不是由蛋白质表达水平的变化引起的。
文献链接：