HIF-1α(一种细胞缺氧反应途径的主要调节因子)的表达在低氧环境下得到了显著上调。CST的HIF1抗体可用于通过一系列测定法(包括蛋白质印迹法和ELISA)检查这些变化。HIF-1α表达升高提示细胞或组织可能在其模型系统中暴露于缺氧状态。
作为转录因子,HIF-1可激活多种下游靶标的表达。评估这些下游靶标以及HIF-1α,可为细胞是否存在缺氧和氧化应激的过程提供依据。点击CST缺氧交互式信号通路可查看HIF-1α下游靶标及产品。
测量线粒体呼吸线粒体是提供主要能量以支持细胞功能的细胞器。来自三聚体的电子通过线粒体内膜上的呼吸链从这些中间体中转移,从而实现了从TCA循环到ATP的代谢物转化。针对线粒体呼吸的检测可直接读出细胞代谢活性。可以通过测量线粒体活性的关键生物标志物来检查线粒体的呼吸作用和功能。其中包括SDHA、COX1以及CST的TricarboxylicAcidCycleAntibodySamplerKit。
评估线粒体完整性线粒体的完整性对于调节细胞能量和调节细胞凋亡至关重要。线粒体完整性可通过MitochondrialMembranePotentialAssayKit(II)和生物标志物细胞色素C进行测定,后者是在细胞凋亡启动期间从线粒体释放到细胞溶质中的。
测量氨基酸代谢氨基酸是细胞蛋白质的构建基础,也是促进细胞过程的关键营养物质。例如,谷氨酰胺是一种重要的代谢燃料,可帮助快速增殖的细胞满足其对ATP的需求。可通过CST谷氨酰胺代谢相互作用通路直接访问可用于研究氨基酸代谢的CST产品的链接,包括GLS、IDH1和IDH2等关键酶。测量mTOR活性雷帕霉素(mTOR)的机制靶标是丝氨酸苏氨酸激酶,其可作为细胞生长和代谢的主要调节剂。mTOR整合了细胞外生长因子、细胞因子的信号转导,并充当营养传感器来影响多种细胞过程,包括细胞增殖、存活、细胞生长和蛋白质翻译。mTOR存在于两种不同的信号复合体中,称为mTORC1和mTORC2,它们主要通过PI3K/AKT、ERK1/2和AMPK通路接收信号输入。mTORC1的主要下游靶点包括p70/S6K和4E-BP1/2,而mTORC2通过SGK1、PKCa和AKT传递信号。可以使用CSTmTOR底物小包装抗体套装来查询mTOR信号的组分,该试剂盒包括:mTOR丝氨酸/苏氨酸激酶Phospho-p70S6kinase(Thr)mTORC1的下游效应子Thr与激酶活性相关Phospho-p70S6kinase(Ser)mTORC1的下游效应子Ser与激酶活性相关Phospho-4E-BP1(Thr37/46)mTORC1的下游效应子可抑制帽依赖性翻译,Thr37/46是mTOR活性的读数Phospho-mTOR(Ser)mTORSer通过PI3K/AKT激活被磷酸化评估AMPK活性-代谢的主要调节因子AMP活化蛋白激酶(AMPK)是调节葡萄糖和脂质代谢的细胞能量稳态的主要调节因子。AMPK可磷酸化下游靶标,以调节葡萄糖代谢(例如PFKFB3、GYS1)、脂质代谢(例如HMGR、ACC1、PLD1)、转录(例如HDAC4/7、p、Srebp1)和细胞生长/自噬(例如Raptor、ULK1、Becilin-1)。可使用CSTAMPK底物小包装抗体套装中的试剂查询AMPK信号的组分,该试剂盒包括:AMPKa丝氨酸/苏氨酸激酶Phospho-AMPKa(Thr)丝氨酸/苏氨酸激酶在Thr位点的磷酸化对于激活至关重要ULK1丝氨酸/苏氨酸激酶和AMPK与自噬相关的下游效应子Phospho-ULK1(Ser)AMPK在Ser位点上使ULK1磷酸化对饥饿诱导的自噬、低营养素和低能量条件下的细胞存活以及线粒体平衡非常关键。RaptorAMPK底物和mTORC1组分Phospho-Raptor(Ser)Ser由AMPK磷酸化,以抑制mTORC1Beclin-1与自噬相关的AMPK下游效应子Phospho-Beclin-1(Ser93)Ser93位点(在人类中)被AMPK诱导的自噬磷酸化。对应于鼠类,是Ser91位点。测量Warburg效应Warburg效应是许多癌症的代谢适应,饥饿促进癌细胞的生长和存活。具体来说,即使在有氧的情况下,癌细胞也倾向于通过糖酵解而不是更有效和常用的氧化磷酸化通路进行代谢。一些信号通路(包括PI3K/AKT和RAS的激活)参与了Warburg效应。此外,丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)的二聚体形式被认为在Warburg效应中起中心作用。Warburg效应的一个特征是乳酸的生成量增加。查看CST-Warburg效应信号通路,可以直接获得有助于Warburg效应的关键组分和产品来测定其表达和活性。评估胰岛素受体(IR)信号转导胰岛素是控制细胞能量功能(如葡萄糖和脂质代谢)的主要激素,通过结合并激活胰岛素受体酪氨酸激酶发挥作用。受体激活主要通过PI3K/AKT和ERK1/2通路诱导IRS家族衔接蛋白的募集和下游活化,从而影响许多细胞过程。可以使用CST胰岛素受体底物小包装抗体套装中的试剂来测定胰岛素受体信号转导的组分,该试剂盒包括:IRS-1胰岛素受体信号转导接头蛋白Phospho-IRS-1(Ser)Ser由JNK和IKK磷酸化Phospho-IRS-1(Ser)Ser的磷酸化由PKC和mTOR通路介导Phospho-IRS-1(Ser)mTORC1的下游效应子可抑制帽依赖性翻译,Thr37/46是mTOR活性的读数IRS-2胰岛素受体信号转导接头蛋白其他基于化学的测定法来测量代谢还有其他几种方法可测量细胞中关键代谢过程的水平和活性。这些方法包括:氧化辅因子(包括NAD+/NADH和NADP+/NADPH)的检测,通常通过酶标仪上的细胞提取物的比色分析完成
通过细胞裂解产物的HPLC或比色测定,对甲基化循环中心成分S腺苷蛋氨酸和S腺苷蛋氨酸进行定量。
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