自此基础上,在“AngewandteChemie”上发表的“ACrypticPlantTerpeneCyclaseProducingUnconventional18-and14-MemberedMacrocyclicC25andC20TerpenoidswithImmunosuppressiveActivity”中,作者通过挖掘结合异源表达的米团花腺毛状体的转录组,鉴定了一种不寻常的、多用途的萜类合成酶,它可以合成18元和14元环大环二倍半萜和14元环大环二萜。利用分子对接和定点诱变技术揭示了酶活性和产物谱的关键氨基酸残基,并构建了两种二倍半萜产量显著增加的变异酶,同时证实了一些新的二倍半萜的免疫抑制活性。
为了寻找sesterTPSs,作者重点研究了属于TPS的米团花腺状毛状体转录组中的TPSs——一个包含所有已知的十字花科sesterTPSs的亚科。利用5’和3’快速扩增(RACE)获得全长序列后,作者鉴定了一个具有保守的DDxxD和NSE/DTE基序的I类TPS,命名为LcTPS2。LcTPS2被预测定位于叶绿体,在截断LcTPS2的n端预测信号序列后,该基因在大肠杆菌中表达,气相色谱-质谱(GC-MS)分析表明,大肠杆菌产生多种特定产物,其中6个产物(峰1-6)在m/z有特征分子离子峰,2个产物(峰7-8)在m/z有特征分子离子峰(Figure2和S2),提示LcTPS2的产物可能是二倍半萜和二萜。
FigureS2.Massspectraof