这周进行了本期的第二次月考，生物试题点击查看：
（巴蜀中学第二次月考生物试题）
其中出现了一道选修三关于基因工程的试题，如下：
第一空考查了限制酶切割的两种方式，即黏性末端和平末端是怎么产生的。其实就是教材上对它的详细描述，得分率极其极其的低！只能说命题的人真的在认真找考题切入点。意外总是在意想不到的地方出现。
常规的考法可能就是这样：
裸奔式：目的基因的获取需要酶切割。
情景式：从图中选择目的基因插入的位置，需要具体什么酶。
搜集了一下，关于限制酶的考题方式：
一、酶切结果的推导限制酶作为酶类，决定其催化作用具有高效性、专一性和作用条件温和等特点。其中专一性的具体表现为：某种限制酶只能催化DNA上特定序列特定位点的磷酸二脂键水解，结果是使DNA分子被分割成不同的DNA片段。限制酶所识别的双链DNA上的序列具有“回文对称”性质，即无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，即错位平切，产生的是黏性末端；当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，即平切，产生平末端。错位切的限制酶在基因工程中最常使用，因为与平末端相比较，黏性末端更有利于DNA片段的连接。例1下面是5种限制性内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图（↓表示剪切点、切出的断面为黏性末端）：
限制酶1：——↓GATC——；限制酶2：——CATG↓——；
限制酶3：——G↓GATCC——；限制酶4：——CCGC↓GG——；
限制酶5：——↓CCAGG——。
请指出下列哪组表达正确（）
A．限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对
B．限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对
C．限制酶1和3剪出的黏性末端相同
D．限制酶1和2剪出的黏性末端相同
二、酶切方法的选择
构建重组质粒，需要用限制酶分别切割含目的基因的DNA片段和质粒，切割方法主要有单酶切和双酶切。单酶切是指用同一种限制酶对含目的基因的DNA和质粒进行切割，目的基因序列的两边必须各有一个能被该限制酶识别的序列及切点，而质粒至少有一个识别序列及切点，这样被切割的质粒与切下的目的基因两边形成相同的黏性末端，以实现连接而形成重组质粒，有时也可以用两种不同的限制酶（同尾酶）切割产生相同的黏性末端。双酶切是指用两种限制酶进行切割，含目的基因的DNA和质粒上都必须有能被这两种限制酶识别的序列及切点，结果两者都会产生具有两种不同的黏性末端的DNA片段，两个末端分别用A与B表示，然后混合起来，那么载体分子的A端与目的基因的A端连接，载体分子的B端与目的基因的B端连接，形成重组DNA分子，这样就可以避免DNA连接酶催化时被切割后的质粒自连成环的现象，并能保证质粒与目的基因的定向连接。
例2基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。根据图示,判断下列操作正确的是()
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
三、酶切图谱的构建
酶切图谱是指选取某一特定长度的DNA分子，用多种限制酶单独或联合切割，再通过电泳技术将酶切片段进行分离，计算相对大小，以确定每一种限制酶在DNA分子中的切点位置和相对距离，并据此绘制而成的物理图谱（一般以直线或环状图式表示）。
例3.用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1kb即个碱基对)，请在下图中画出质粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。
参考答案：
可能也有小伙伴儿会说：老师，我都长期做选修一，高考场上这个点跟我没有半毛钱关系……
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