每个实验室都有各种各样的载体，每个实验阶段也在使用不同的载体。
那么，你对你使用的载体了解多少呢？
我随机采访了几个生物专业的硕士同学：
同学A（做大肠表达）：pGEX-4T-2载体，大肠表达载体，大小约为5kb，抗性为Amp，带有GST标签，有BamHI以及EcoRI酶切位点.....
我：那...有看过图谱吗？
同学A：木有(｀Д)!!
同学B（做酵母表达）：pPICZα/A载体，毕赤酵母表达载体，大小约为3.5kb，抗性为Zeocin
同学C（做大肠表达）：pET-28a(+)，载体，大肠表达载体，大小约为5.4kb，抗性为Kana，6xHis标签
...然而，他们都没有看过载体图谱!
那么，我们今天就来讲讲载体图谱！
其实，在我的眼里，载体是这样的：比如，pET-28a(+)
首先它是大肠表达载体，大小为bp，胞内表达目的基因
然后，我们对其元件进行一个个的分析：
复制子：ColE1/pMB1/pBR/pUCori——起始载体的复制；f1ori——f1噬菌体复制子，显示正义链合成方向KanR：编码氨基糖苷磷酸转移酶，在原核细胞中产生卡那霉素抗性，在真核细胞中产生遗传霉素筛选标记Rop：编码ROP蛋白，使得质粒维持低拷贝水平乳糖操纵子元件——lacIpromoter+lacI(启动阻遏蛋白的表达，是lacoperator的抑制因子)，lacoperator（lac操纵基因，阻遏蛋白与之结合后抑制其后基因的表达，乳糖类似物IPTG可与阻遏蛋白结合从而失去对lacoperator的控制，进而使得其后基因正常表达）T7promoter：受控于T7RNA聚合酶的启动子，是当今大肠杆菌表达系统的主流。强大的T7启动子完全专一受控于T7RNA聚合酶，而高活性的T7RNA聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍，当二者同时存在时，宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白。6xHis（6xHis亲和标签）：MCS区C端和N端各有一个，编码6个连续的His，用来作为纯化目标蛋白的标签throbinsite：Thrombin蛋白酶切位点T7tag：提升翻译效率MCS：多克隆位点区域T7terminator：受控于T7RNA聚合酶的终止子
接下来是第二个载体
pPICZα/A
它是毕赤酵母表达载体，大小为bp
整合型载体（将DNA整合到毕赤酵母基因组上以实现表达）
可将目的蛋白分泌到胞外
然后，它的元件：
ori：ColE1/pMB1/pBR/pUC复制子：起始载体的复制AOX1promoter：甲醇诱导型启动子，表明载体需要甲醇诱导才可表达α-factorsecretionsignal：分泌信号肽，使得目的基因表达的蛋白分泌到胞外MCS：多克隆位点Myc：载体标签，有对应抗体，可用于做western-blot杂交应用中。6xHis：（6xHis亲和标签）：MCS区C端和N端各有一个，编码6个连续的His，用来作为纯化目标蛋白的标签AOX1terminator：转录终止子TEF1promoter：EF-1α启动子-在真核细胞中启动抗性结合蛋白的表达EM7promoter：细菌启动子-在原核细胞中启动抗性结合蛋白的表达BleoR：Zeocin抗性基因CYC1terminator：转录终止子
当然，有时候并不需要你这么仔细的去分析载体
但是对于载体的基本元件还是要知悉的，比如载体启动子，抗性元件，多克隆位点，载体标签
当你看懂了这些元件后，你就会懂得：为什么这个载体是诱导型载体？为什么这个载体可以用XX标签纯化？等等
但是有很多小伙伴表示不会看载体图谱
那么我就来分享一下多年以来的经验
1.准备工作：
确定了载体之后（点击图片放大就能看清楚啦）：
好啦，今天关于载体的内容就到这里啦~
我是丰晖生物
分子技术支持——贾美露
这是我的第一篇文章，希望大家多多支持
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